[发明专利]一种提高槐角中染料木素含量的方法

说明书

本发明公开了一种提高槐角中染料木素含量的方法，所述方法为：将槐角加入糖苷酶粗酶液中，在30‑35℃、100‑200r/min的振荡条下转化24‑72h(优选30℃、24h)，过滤除去粗酶液，滤饼烘干，即得富含染料木素的槐角；所述糖苷酶粗酶液是米根霉GDMCC No:60145发酵液过滤除去菌体获得的滤液。槐角中的染料木素含量提高幅度大，最高可达21.5倍，含量由原来的2.34mg/g提高到52.7mg/g；本发明具有专一性好、产物结构不会被破坏、生物催化剂的成本低，且可使槐角中多种糖苷转化为染料木素，其含量提高幅度大。

(一)技术领域

本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种采用生物转化法提高中药槐角中染料木素含量的方法。

(二)背景技术

槐角(Sophorae Fructus)为我国传统中药材，是豆科植物槐(Sophora japonicaL.)的干燥成熟果实(完整的豆荚)。槐角始载于《神农本草经》，列为上品。性寒、味苦，归肝、大肠经，具有清热泻火，凉血止血的功效，用于肠热便血，痔肿出血，肝热头痛，眩晕目赤。槐角是历版《中华人民共和国药典》均收载的中药品种，据统计，槐角为原料生产的槐角丸、地榆槐角丸、脏连丸达30多种，对治疗冠心病、高血压、脑血管栓塞等病症，疗效显著。

槐角的主要药效成分为槐角苷(sophoricoside，CAS号152-95-4)，又名为槐苷、槐黄苷、染料木素-4'-葡萄糖苷(genistein-4'-glucoside)，是历版中国药典要求的质控成分，如2015版《中华人民共和国药典》要求槐角干燥品中，槐角苷含量不得低于4.0％。槐角除了含有槐角苷之外，还含有它的苷元染料木素(genistein，CAS号446-72-0)，以及染料木素的其他糖苷形式，包括染料木苷(genistin，genistein-7-glucoside，CAS号529-59-9)、槐角双苷(sophorabioside，genistein-4'-diglucoside，CAS号2945-88-2)、染料木素-7-双葡萄糖苷(genistein-7-diglucoside,genistein-7-cellobioside)和染料木素-7,4'-双葡萄糖苷(genistein-7,4'-diglucoside，CAS号36190-98-4)等。染料木素又称染料木黄酮、染料木因和金雀异黄素等，属于异黄酮类化合物，在槐角中的含量为0.2％左右。染料木素的结构与雌二醇类似，因此有植物雌激素之称，具有抗炎、抗生育和预防骨质疏松症的疗效，近年来不少学者对染料木素的生物活性进行了研究，发现其还具有抗氧化、降血脂和抗肿瘤等生物活性。

现代药理学研究表明，槐角苷只有被体内肠道菌群转化为染料木素后才能发挥效用。但人体摄入的槐角苷，并不是都能被肠道菌群转化为染料木素而被吸收，如果肠道菌群产生的糖苷酶活性较弱，槐角苷进入肠道后，不能被转化，发挥的药效就较弱，甚至不能发挥作用。所以，如果在体外将槐角苷以及染料木素的其他糖苷都转化为染料木素，槐角的药理作用将显著提高。

目前，已有文献报道采用酸水解或酶转化处理槐角，染料木素的提取率显著提高。但是，酸水解专一性差，容易破坏苷元的结构，导致产物收率低，并产生非药效物质等问题；而利用商品糖苷酶(如中国发明专利CN101760488.A采用的是淀粉酶、纤维素酶或β-葡萄糖苷酶等)转化处理槐角，只能转化少数种类的染料木素糖苷，存在效率低、成本高的缺点，致使这些技术工业化应用困难。

由此可见，如果采用微生物发酵的复合糖苷酶处理槐角，可以将其中各种形式糖苷，都转化为染料木素(图1)，含量可大幅度提高，而且微生物产生的多糖水解酶对槐角组成结构的纤维素和半纤维素降解，使槐角质地疏松，从而有利于染料木素的释放。经过转化处理的槐角，既可作为中药材应用中药方剂，疗效将显著提高；也可以作为染料木素提取的原料，提取率将大幅度提高。

(三)发明内容

本发明目的是采用微生物发酵制备的复合糖苷酶，生物转化法处理中药槐角，提高其染料木素的含量。经转化处理的槐角中，染料木素的含量显著提高，最高可达21.5倍。本发明工艺具有成本低、流程简单、转化率高等优点。