[发明专利]分子标志物SKA2在转移性肾透明细胞癌中的应用

说明书

本发明为分子标志物SKA2在转移性肾透明细胞癌中的应用，涉及一种分子标志物在预测肾透明细胞癌转移中的应用，所述分子标志物为SKA2；本发明首次发现了肾透明细胞癌发生转移的生物标志物‑‑SKA2表达水平的升高；通过检测病人组织和血液中SKA2的表达，来实现肾透明细胞癌发生转移的早期诊断；并且本发明首次提供了预测和治疗肾透明细胞癌转移的分子靶标，通过靶向与分子标志物来治疗转移性肾透明细胞癌具有敏感性和特异性。

技术领域

本发明属于生物医药领域，特别涉及分子标志物SKA2在转移性肾透明细胞癌中的应用。

背景技术

肾细胞癌(renal cell carcinoma，RCC)是起源于肾实质泌尿小管上皮的肾脏恶性肿瘤，主要包括透明细胞癌(clear cell RCC，ccRCC)、乳头状细胞癌(papillary RCC，pRCC)和嫌色细胞细胞癌(chromophobe RCC，chRCC)。由于肾透明细胞癌发病隐匿，30％的患者在确诊时已发生转移；此外，转移性肾透明细胞癌(m-ccRCC)对放化疗不敏感，预后较差，5年生存率多低于10％。虽然靶向药物(舒尼替尼和索拉非尼、帕唑帕尼、特西罗莫司和依维莫司)的使用使得治疗组患者的疾病无进展时间和肿瘤反应率得到明显改善，患者的总体生存时间也明显长于对照，然而，药物治疗中引起的耐药和不良反应导致患者的使用风险大于获益。因此，寻找高灵敏度和高特异性的肾透明细胞癌转移分子标志物有重大的临床意义。

SKA2是纺锤体与动粒相关复合物(spindle and kinetochore associatedcomplex,SKA)的一个亚基。传统观点认为，SKA2在细胞周期有丝分裂过程中参与维持分裂中期赤道板的形成和控制纺锤体检测点的适时关闭。然而，Rice等在2008年首次发现SKA2在多株小细胞肺癌和乳腺癌细胞系中的表达水平显著上调；并且SKA2在乳腺癌肿瘤组织中的亚细胞定位也呈现异常。仅有的这几篇文献提示，SKA2可能参与肿瘤的发生和发展。我们在前期结果中发现，转录因子CREB通过靶向结合SKA启动子区域的CRE位点，下调SKA2的表达，进而抑制肾癌细胞的增殖。然而，SKA与肾透明细胞癌的转移关系尚待揭示。

因此，结合临床成本效益原则，开发新型肿瘤标志物尤其是针对肾透明细胞癌转移的精准诊断具有重要意义。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种转移性肾透明癌的生物标志物，灵敏和特异性的实现转移性肾透明癌的诊断和治疗。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了分子标志物在预测肾透明细胞癌转移中的应用，所述分子标志物为SKA2。

本发明的第一个目的是针对上述具体应用，首先通过RT-PCR，实时定量PCR和Western blot印迹法来测定样本中SKA2基因的变化进行诊断。具体为：(1)从医院收集肾癌和配对癌旁组织；(2)培养人肾小管上皮细胞HK-2和肾癌细胞；通过特定的引物/抗体扩增/鉴定组织和细胞中的SKA2基因/蛋白，进而发现SKA在肿瘤细胞和组织中的表达显著性高于对照，其作为癌基因影响肾透明细胞癌的发生发展。

其次确定转移病人中肾原发灶和转移淋巴结组织中的SKA2表达；并分析病人资料，比较有无转移病人的原发灶中SKA2的表达异同；在转移性肾透明细胞癌组织中发现转移性淋巴结中SKA2的表达显著性低于原发灶，提示SKA2降低促进肾透明细胞的转移。

第三研究裸鼠尾静脉注射和细胞划痕、侵袭实验研究降低SKA2表达对肾癌细胞迁移的影响；并通过抑制SKA2的表达，划痕、transwell、和尾静脉注射；方法阐明降低细胞内SKA2的表达后，细胞的转移和侵袭能力都显著性增强。

上述发现表明，SKA2的降低促进肾癌细胞的转移；其在细胞中表达水平的突然下降可能是肿瘤转移的预警信号。