[发明专利]杀灭金黄色葡萄球菌的嵌合酶抗生素及其制备和应用

说明书

本发明提供了一种杀灭金黄色葡萄球菌的嵌合酶抗生素及其制备和应用。所述嵌合酶抗生素包括胞质转导肽CTP与金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶JDlys串联的重组蛋白CTP‑JDlys。所述嵌合酶抗生素的制备方法包括：S1、设计引物，分别以裂解酶JDlys基因和胞质转导肽CTP基因为模板，扩增JDlys基因片段和CTP基因片段；S2、将扩增得到的JDlys基因构建重组质粒，将扩增得到的CTP基因插入至所述重组质粒中JDlys基因的5`端，构建含目标基因片段CTP‑JDlys的重组质粒；S3、将所述含目标基因片段CTP‑JDlys的重组质粒经表达、纯化后，获得嵌合酶抗生素蛋白CTP‑JDlys。本发明提供的CTP‑JDlys蛋白能进入皮肤角质细胞内高效治疗耐药金黄色葡萄球菌引起的小鼠皮肤脓肿。

技术领域

本发明属于生物技术领域，是一种生物技术领域的新型酶抗生素的制备及其治疗表皮角质细胞内细菌感染的应用，具体涉及一类能够高效进入真核细胞内部杀灭耐药金黄色葡萄球菌的新型嵌合酶抗生素的生物合成及胞内和皮肤脓肿杀菌效果的评估；更具体地，涉及一种杀灭金黄色葡萄球菌的嵌合酶抗生素及其制备和应用。

背景技术

皮肤及皮肤组织感染(skin and skin structure infections,SSSIs)是由各类化脓性致病菌侵犯表皮、真皮和皮下组织引起的炎症性疾病。引起SSSIs的病原体有很多，主要包括金黄色葡萄球菌、埃希氏大肠杆菌及绿脓假单胞菌等。其中，金黄色葡萄球菌是引起SSSIs最常见的病原菌。皮肤角质细胞是皮肤表皮中最主要的细胞，积极参与和协调皮肤的先天免疫反应。最近的研究表明，在金黄色葡萄球菌感染的早期，角质细胞能够发挥类似免疫细胞的功能，识别并传递病原信号，并且能够产生抗菌肽和促炎性细胞因子抵抗金黄色葡萄球菌的感染。研究表明金黄色葡萄球菌能够入侵角质细胞并在其内持续存活，从而逃避上述一系列的免疫反应，导致皮肤的持续感染。然而，大多数抗菌药物对金黄色葡萄球菌引起的皮肤感染束手无策。例如，抗生素很难自由的进入真核细胞，无法有效的杀灭细胞内的细菌；而小分子抗菌肽抗菌谱较广，从而导致皮肤中微生态平衡的破坏。此外，近年来，由于抗生素的过度使用，临床分离的金黄色葡萄球菌出现了严重的耐药情况(例如耐甲氧西林葡萄球菌(MRSA)的分离)，这对金黄色葡萄球菌引起的皮肤感染的治疗提出了更严峻的挑战，因此寻求一类高效不耐药的抵抗胞内感染的新型抗菌制剂显得尤为重要。

噬菌体是一类可以感染并裂解细菌的病毒，其强大的裂菌功效主要得益于感染后期合成的细胞壁水解酶，该酶可通过特异性水解细胞壁氨基糖之间的糖苷键，达到快速裂解细菌的目的，因此也称为酶抗生素或裂解酶(Lysin)。与抗生素相比，酶抗生素活性强，作用迅速，且不易诱导细菌产生耐药性，也不会对人和动物产生不良影响，是解决现在日趋严重的细菌耐药性的一种选择性方法。作为一类大分子蛋白酶，该类酶抗生素无法自由进入真核细胞内部，因此对细菌引起的胞内感染并无良好的治疗效果。

发明内容

本发明的目的在于克服现有抗菌制剂对胞内细菌感染治疗的不足，提供一种能够进入真核细胞内部的酶抗生素的技术方法。