[发明专利]香樟的愈伤组织培养方法

权利要求书

1.一种香樟的愈伤组织培养方法，其特征在于，按照下述步骤进行：

步骤1，将香樟叶柄和茎部冲洗干净，得到基础材料，将所述基础材料用体积浓度为80～85％的乙醇水溶液浸泡10～15秒后取出，用15～20wt％的次氯酸钠水溶液浸泡10～15分钟并同时搅拌，得到脱毒材料；

步骤2，用无菌水冲洗步骤1所得脱毒材料3～5次，吸干脱毒材料表面的无菌水，将该脱毒材料剪切成块状后放到灭菌后的诱导培养基中，于20～25℃培养7～14天，得到愈伤组织；

其中，所述诱导培养基的配制方法如下：

将MS培养基与6-苄氨基腺嘌呤和萘乙酸均匀混合，调整pH至6.9～7.1，再加入琼脂，其中，所述MS培养基的体积份数、6-苄氨基腺嘌呤的质量份数、萘乙酸的质量份数和琼脂的质量份数的比为1000：(1～1.5)：0.2：(6300～6500)。

2.根据权利要求1所述的愈伤组织培养方法，其特征在于，在所述步骤2中，所述MS培养基的配制方法如下：

将大量母液、微量母液、铁盐母液、有机母液和蔗糖均匀混合，再用去离子水定容，以使1000体积份数的所述MS培养基中，所述大量母液的体积份数为100，所述微量母液的体积份数为10，所述铁盐母液的体积份数为10，所述有机母液的体积份数为5，所述蔗糖的质量份数为14500～15500。

3.根据权利要求2所述的愈伤组织培养方法，其特征在于，所述大量母液的组成如下：

所述微量母液的组成如下：

所述铁盐母液的组成如下：

Na₂-EDTA _{1.853～1.859g/L}

FeSO₄·7H₂O 1.387～1.393g/L

去离子水 _溶剂，

所述有机母液的组成如下：

。

4.根据权利要求3所述的愈伤组织培养方法，其特征在于，当所述体积份数的单位为mL时，所述质量份数的单位为mg。

5.根据权利要求4所述的愈伤组织培养方法，其特征在于，在所述步骤2中，光照周期16小时/天。

6.根据权利要求5所述的愈伤组织培养方法，其特征在于，所述6-苄氨基腺嘌呤通过6-苄氨基腺嘌呤溶液引入，所述萘乙酸通过萘乙酸溶液引入，所述诱导培养基的配制方法如下：

将MS培养基与6-苄氨基腺嘌呤溶液和萘乙酸溶液均匀混合，调整pH至6.9～7.1，再加入琼脂，其中，

所述6-苄氨基腺嘌呤溶液的制备方法：将所述6-苄氨基腺嘌呤加入NaOH水溶液以使其均匀分散，再加入去离子水配制成1.2～1.5g/L的所述6-苄氨基腺嘌呤溶液，所述6-苄氨基腺嘌呤溶液中NaOH的浓度为0.02～0.1mol/L，所述NaOH水溶液中NaOH的浓度为0.1～0.5mol/L。

7.根据权利要求6所述的愈伤组织培养方法，其特征在于，所述萘乙酸溶液的制备方法：将所述萘乙酸加入乙醇以使其均匀分散，再加入去离子水配制成0.2g/L的所述萘乙酸溶液，所述萘乙酸溶液中乙醇的体积浓度为18～20％。

8.根据权利要求7所述的愈伤组织培养方法，其特征在于，所述诱导培养基还包括：活性炭粉末，所述诱导培养基的配制方法如下：将MS培养基与6-苄氨基腺嘌呤溶液、萘乙酸溶液和活性炭粉均匀混合，再加入琼脂，所述MS培养基的体积份数：活性炭的质量份数为1000：(150～250)。

9.根据权利要求8所述的愈伤组织培养方法，其特征在于，在所述步骤1中，诱导培养基灭菌的方法为：将所述诱导培养基置于高温灭菌锅中灭菌20～25分钟，灭菌压力为100～120kPa，灭菌温度为120～125℃。

10.根据权利要求1或9所述的愈伤组织培养方法，其特征在于，所述大量母液的配方如下：

所述微量母液的配方如下：

所述铁盐母液的配方如下：

Na₂-EDTA _1.856g/L

FeSO₄·7H₂O 1.390g/L

去离子水 ^溶剂，

所述有机母液的配方如下：