[发明专利]外周血CTL细胞的培养方法

说明书

本发明涉及一种外周血CTL细胞的培养方法。该方法包括：1)将由外周血分离得到的PBMC接种于包被有CD3抗体及CD28抗体的培养容器中进行培养；培养体系中的细胞因子为IFN‑γ900U/mL～1100U/mL；2)向培养体系中加入IL‑1α和IL‑2，终浓度均为900U/mL～1100U/mL；培养体系中还加入有IL‑7，终浓度为4～6ng/mL；3)换液，新的培养体系中的细胞因子为IL‑2 900U/mL～1100U/mL，IL‑7，2～3ng/mL，基础培养基为含4％～6％自体血浆的VIVO培养基。该方法CTL扩增效果好，且活化的CTL占比更高、T‑reg细胞占比更低。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体而言，涉及一种外周血CTL细胞的培养方法。

背景技术

细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte,CTL)，是一种特异性，具有杀伤功能的T细胞，专门分泌各种细胞因子参与免疫作用。对某些病毒、肿瘤细胞等抗原物质具有杀伤作用，与自然杀伤细胞构成机体抗病毒、抗肿瘤免疫的重要防线。

被激活的CTL能够产生特异性的肿瘤杀伤活性，这种细胞毒作用主要包括(1)穿孔素-颗粒酶途径(2)活化的CTL高表达FaSL,通过与靶细胞表面FaS抗原结合，可诱导靶细胞凋亡(3)分泌TNF等多种细胞因子直接杀伤靶细胞(4)产生多种趋化因子，吸引天然免疫细胞，杀伤靶细胞(5)释放多种丝氨酸酷酶，通过活化穿孔素而促进杀伤作用。

细胞内感染和肿瘤的保护免疫主要依赖于细胞毒性T细胞(CTL)的应答，CTL对肿瘤细胞实施MHC限制性识别和特异性杀伤。体内外诱导、活化和扩增肿瘤反应性CTL是当前肿瘤免疫治疗研究的重大课题，具有巨大潜在意义。然而现有的CTL体外培育方法，普遍存在扩增CTL倍率低、细胞活性差等问题。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新颖的外周血细胞毒性T细胞(cytotoxiclymphocyte,CTL)的培养方法，该方法操作简单，培养得到CTL质量较好，可用于CTL的大量制备，使该方法更利于推广和应用。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

本发明涉及一种外周血CTL细胞的培养方法，包括：

1)将由外周血分离得到的PBMC接种于包被有CD3抗体及CD28抗体的培养容器中进行培养；培养体系中的细胞因子为IFN-γ900U/mL～1100U/mL；

2)向培养体系中加入IL-1α和IL-2，终浓度均为900U/mL～1100U/mL；培养体系中还加入有IL-7，终浓度为4～6ng/mL；

3)换液，新的培养体系中的细胞因子为IL-2 900U/mL～1100U/mL，IL-7，2～3ng/mL，所述培养体系中的基础培养基为含4％～6％自体血浆的VIVO培养基。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

CTL扩增效果好，且活化的CTL占比更高、T-reg细胞占比更低。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为对本发明一个实施例培养得到的树突状细胞表面标志物进行检测的结果。

具体实施方式

本发明涉及一种外周血CTL细胞的培养方法，包括：