[发明专利]多糖微球及其制备方法

说明书

本发明涉及一种多糖微球及其制备方法，该多糖微球由含有多糖的水相溶液和油相溶液经乳化形成W/O型乳液，再经交联制成，其中，可在该交联过程中添加有水溶性线性聚合物大分子，此外所述水相溶液可含有两种不同种类的多糖，由此制成的多糖微球内部具有有序可控的孔道结构，在层析过程具有高的分辨率。

技术领域

本发明涉及一种高分辨率的多糖微球及其制备方法，该多糖微球可用于生物分离纯化。

背景技术

伴随着生物工程上游技术的飞速发展，逾以万计的生物分子通过基因工程、蛋白质工程和细胞工程制造出来，在医学、药学、生物制造和生命健康等领域发挥着卓越的作用。如何从复杂的生物体系分离纯化得到目标生物分子，这对下游分离工程领域提出了越来越高的要求。高效分离纯化是现代生物分离技术的最重要目标，其中高分辨率分离纯化在分析色谱和制备色谱领域均有很高的需求。

层析介质的孔道结构是影响层析过程分辨率的最主要性质参数之一。在凝胶过滤层析中，不同尺寸的生物大分子进入层析介质后，向这些孔道内部扩散。扩散距离取决于生物大分子和孔道的相对尺寸大小。当生物大分子尺寸大于孔道时，其无法进入孔道内部，扩散距离短，较早流出层析柱；反之，当生物大分子尺寸小于孔道时，其能够进入孔道内部，扩散距离长，较晚流出层析柱，从而实现不同大小的生物分子分离。在离子交换层析、亲和层析等其他层析技术中，介质的孔道结构与蛋白可及面积密切相关，决定了包括载量和分辨率等在内的蛋白分离效果。

作为天然多糖类层析介质，琼脂糖凝胶具备成为理想介质的许多特性，如高亲水性、良好的多孔性、非特异性吸附低、含有丰富的可活化羟基，是迄今为止应用最为广泛的一种层析介质。以商品化的Sepharose FF为例，4FF的分离范围为6万至2000万道尔顿，6FF的分离范围为1万至400万道尔顿，如此宽的分离范围造成的一个主要问题就是分辨率不高。商品化的Superdex系列介质通过减小粒径的方法，虽然在一定程度上提高了层析分辨率，但其数千至数十万道尔顿的分离极限是固定不变的，也就是说在该分离范围内蛋白可以实现分离，超出这个范围则无法分离。有效提高层析介质的分辨率和分离范围，仍是目前分离纯化领域广受关注的方向之一。

发明内容

本发明涉及一种多糖微球的制备方法，其含有以下步骤：

(a)提供含预定浓度的至少两种不同种类的多糖水溶液作为水相W；

(b)提供溶解了油溶性乳化剂且与水互不相溶的油性物质作为油相O；

(c)混合该水相W和油相O来获得W/O乳液；

(d)降低该W/O乳液的温度，使W/O乳液中含多糖的液滴部分固化；

(e)在步骤(d)形成中的W/O乳液中加入交联剂，经交联反应制成多糖微球。

在本发明优选的实施方式中，在步骤(e)中的交联过程中加入有水溶性线性聚合物大分子。

本发明涉及一种多糖微球的制备方法，其含有以下步骤：

(a)提供预定浓度的多糖水溶液作为水相W；

(b)提供溶解了油溶性乳化剂且与水互不相溶的油性物质作为油相O；

(c)混合该水相W和油相O来获得W/O乳液；

(d)降低该W/O乳液的温度，使W/O乳液中的含多糖的液滴部分固化；

(e)在步骤(d)中形成的W/O乳液中加入交联剂，经交联反应制成多糖微球，其中，在交联过程中加入有水溶性线性聚合物大分子。

在本发明优选的实施方式中，所述步骤(a)中的多糖水溶液至少含有两种或两种以上不同种类的多糖。