[发明专利]头孢羟氨苄制备方法

权利要求书

1.一种头孢羟氨苄制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

在水浴恒温的反应器中加入预定体积的离子液体与磷酸盐缓冲溶液组成共溶剂；

向所述共溶剂中加入预定摩尔比的D-HPGM与7-ADCA并搅拌，其中，D-HPGM与7-ADCA的摩尔比为1:1~1:2.0；7-ADCA浓度为 0.1~1.0mol/L；

向加入了D-HPGM与7-ADCA的共溶剂中加入磁性固定化青霉素G酰化酶，磁性固定化青霉素G酰化酶与7-ADCA的质量比为1:10~1:50，持续搅拌使磁性固定化青霉素G酰化酶与D-HPGM与7-ADCA充分接触，直至反应结束，其中控制搅拌转速为150~250 r/min；

将反应结束的反应体系液体分层静置，以使溶解有头孢羟氨苄的上层磷酸盐缓冲溶液与下层离子液体分层，用浓度6 mol/L HCl调节分离出的磷酸盐缓冲溶液的pH 至4.0~5.5，使头孢羟氨苄结晶析出，常规操作分离出晶体在45℃下进行干燥；

其中，所述磁性固定化青霉素G酰化酶是用核壳结构磁性复合物微球作载体，将游离的青霉素G酰化酶进行固定化得到；所述磁性固定化青霉素G酰化酶采用如下方法获得：

核壳结构磁性复合物微球的制备：在反应釜装入2份聚乙烯聚吡咯烷酮、3.2份NaCl和8份可溶性淀粉以及180份去离子水，搅拌下分散均匀；

于烧瓶中装入预定量的FeCl₂·4H₂O和FeCl₃·6H₂O，其中Fe²⁺与Fe³⁺的摩尔比为1:2，加入100份去离子水机械搅拌下使其溶解，加热40℃时滴入浓氨水调节pH为9~10后再加入0.2~0.5份油酸，升温至90℃后恒温2小时；

自然冷却至室温，加入10份苯乙烯、3份乙二醇二甲基丙烯酸酯和0.5份引发剂偶氮二异丁腈；

将烧瓶中的混合液转移至上述反应釜中，水浴加热反应釜至60℃搅拌下恒温2-5小时，制备出Fe₃O₄-聚合物核体；

同反应釜中在30℃下加入0.5份 甲基丙烯酸缩水甘油酯和0.2份 N, N′-亚甲基双丙烯酰胺，搅拌均匀后加热至60℃恒温3~6小时，甲基丙烯酸缩水甘油酯与N, N′-亚甲基双丙烯酰胺在Fe₃O₄-聚合物核体表面交联聚合，制备出表面富含环氧基的核壳复合物磁性小球；

所述磁性固定化青霉素G酰化酶的制备：称取0.1 份上述核壳复合物磁性小球，加入经0.1 mol/L pH为7.0磷酸缓冲溶液稀释的青霉素G酰化酶溶液，其中V_{磷酸缓冲溶液}：V_{青霉素G酰化酶溶液} =2:1，混合均匀，30℃的空气摇床振荡反应12-24小时，摇床转速为100-150 r/min；

磁力作用下分离固定化酶，用磷酸盐缓冲溶液洗3次获得所述磁性固定化青霉素G酰化酶。

2.如权利要求1所述的头孢羟氨苄制备方法，其特征在于：所述离子液体-磷酸盐缓冲溶液共溶剂中，离子液体的质量为总溶剂质量的40%~60%，所述磷酸缓冲溶液的pH值为6.0~8.0，浓度为0.10~0.50 mol/L。

3.如权利要求1所述的头孢羟氨苄制备方法，其特征在于：所述离子液体为1-丁基-3-甲基咪唑双三氟甲磺酰亚胺盐、1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐、1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、1-辛基-3-甲基咪唑六氟硼酸盐、1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐离子液体和1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐中的任意一种。

4.如权利要求1所述的头孢羟氨苄制备方法，其特征在于：合成所述头孢羟氨苄的反应温度在20~50℃；反应时间为5-15h。

5.如权利要求4所述的头孢羟氨苄制备方法，其特征在于：合成所述头孢羟氨苄的反应温度在为30~40℃，反应时间为8~12h。

6.如权利要求1所述的头孢羟氨苄制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：磁力作用下分离磁性固定化青霉素G酰化酶，用磷酸盐缓冲溶液冲洗，获得所述磁性固定化青霉素G酰化酶。