[发明专利]精确基因组编辑的新策略

权利要求书

1.一种用至少一个目标核酸序列在预定位置修饰细胞系统的遗传物质的方法，其中所述方法包括以下步骤：

(a)提供包括聚合酶θ酶或其编码序列，以及NHEJ途径的一种或多种其他酶或其编码序列的细胞系统；

(b)灭活或部分灭活所述聚合酶θ酶或所述其编码序列，以及灭活或部分灭活所述NHEJ途径的一种或多种其他DNA修复酶或所述其编码序列；

(c)将以下项引入所述细胞系统中

(i)所述至少一个目标核酸序列，其任选地侧翼为与邻近所述预定位置的一个或多个核酸序列互补的一个或多个同源序列，以及

(ii)至少一种位点特异性核酸酶或其编码序列，所述位点特异性核酸酶在所述预定位置处诱导双链断裂；以及

(d)任选地：确定在所述细胞系统的遗传物质中所述预定位置处的所述修饰的存在；

(e)获得包括在所述细胞系统的遗传物质中所述预定位置处的修饰的细胞系统。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包括附加步骤：

(f)在包括所述预定位置处的修饰的所述细胞系统中或在其子代系统中恢复所述灭活或部分灭活的聚合酶θ酶的活性，以及/或者恢复所述灭活或部分灭活的NHEJ途径的一种或多种其他DNA修复酶的活性。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中待灭活或部分灭活的所述聚合酶θ酶包括根据SEQ ID NO:2、7、8、9或10的氨基酸序列，或者分别与SEQ ID NO:2、7、8、9或10中列出的序列具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或者由根据SEQ ID NO:1、3、4、5或6的核酸序列，或者分别与SEQ ID No:1、3、4、5或6中列出的序列具有至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的核酸编码。

4.根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其中待灭活或部分灭活的所述NHEJ途径的一种或多种其他DNA修复酶独立地选自由以下项构成的群组中：Ku70、Ku80、DNA依赖性蛋白激酶、共济失调毛细血管扩张突变(ATM)、ATM-和Rad3-相关(ATR)、Artemis、XRCC4、DNA连接酶IV和XLF，或其任何组合。

5.根据权利要求4所述的方法，其中NHEJ途径的至少两种、至少三种或至少四种其他DNA修复酶被灭活或部分灭活，优选地其中至少Ku70和DNA连接酶IV，或其中至少Ku80和DNA连接酶IV被灭活或部分灭活。