[发明专利]含核酸脂质纳米粒子及其用途

说明书

本发明提供了一种脂质纳米粒子，其含有以下组分(a)至(c)：(a)编码嵌合抗原受体(CAR)或外源性T细胞受体(TCR)的核酸；(b)阳离子脂质；和(c)非阳离子脂质。本发明还提供了一种表达CAR或表达外源性TCR的免疫细胞，其通过将所述脂质纳米粒子引入体内或离体T细胞而产生；以及一种使用所述免疫细胞治疗包括癌症的疾病的体内或离体治疗手段。

技术领域

本发明涉及含有编码嵌合抗原受体或T细胞受体的核酸的脂质纳米粒子；通过使用所述脂质纳米粒子在感兴趣的免疫细胞中表达嵌合抗原受体或外源性T细胞受体的方法；其药物用途；等。

背景技术

使用引入了源自癌症抗原特异性杀伤T细胞的嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)的基因的CAR-T细胞或TCR-T细胞进行癌症免疫疗法的研究和发展进展迅速。当前的CAR-T细胞疗法，诸如在美国获得批准的Kymriah(商品名)和Yescarta(商品名)，通常包括通过使用病毒载体诸如慢病毒载体转染从具有CAR基因的患者收集的离体T细胞来制备CAR-T细胞，并向患者施用CAR-T细胞。然而，该方法的问题在于，由于细胞培养和病毒载体制备的成本，生产成本变高。如果可以将CAR或外源性TCR选择性地引入体内免疫细胞例如T细胞，那么无需离体制备，并且可以提供生产成本低的CAR-或TCR-免疫细胞疗法。另外，如果可以在不使用需要高生产成本的病毒载体的情况下将CAR或外源性TCR选择性地离体引入免疫细胞例如T细胞，那么消除了病毒残留检测等的成本，并且可以提供生产成本低的CAR-或TCR-免疫细胞疗法。

已经报道了CAR向T细胞的离体或体内转染，其使用含有编码CAR的质粒DNA和阳离子聚合物的聚集体的纳米粒子，所述聚集体被与抗CD3抗体片段缀合的非阳离子聚合物包被(专利文献1，非专利文献1)；或者使用含有介孔二氧化硅的纳米载体，所述介孔二氧化硅在孔中包封了编码CAR的DNA并包被有具有被抗CD3抗体修饰的表面的脂质(专利文献2)。

除此之外，已经报道了通过将靶siRNA包封在“脂质纳米粒子(LNP)”中将siRNA递送至靶细胞的技术，所述“脂质纳米粒子(LNP)”没有内部孔结构并且由阳离子脂质、非阳离子辅助脂质以及用于递送至靶细胞的配体组成。例如，已经报道了通过使用抗CD4抗体片段作为靶向配体将用于CD45的siRNA离体或体内转染到T细胞中(专利文献3，非专利文献2)。

然而，迄今为止，没有报道通过使用LNP将编码CAR或外源性TCR的核酸(例如，mRNA，DNA)选择性地引入免疫细胞例如T细胞中。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：US 2017/0296676

专利文献2：US 2016/0145348

专利文献3：WO 2016/189532

非专利文献

非专利文献1：Nature Nanotechnology 12，813-820(2017)

非专利文献2：ACS Nano，2015，9(7)，6706-6716

发明内容

技术问题

本发明的目的是提供一种新颖的转染技术，其能够有效地将CAR或外源性TCR选择性地引入体内或离体的免疫细胞诸如T细胞，从而以低生产成本提供CAR-或TCR-免疫细胞疗法。本发明的另一个目的是提供一种避免病毒蛋白抗原性问题的更安全的CAR-或TCR-免疫细胞疗法。

问题的解决方案

为了实现上述目的，本发明人进行了深入研究，并成功地通过使用LNP有效地将编码CAR或外源性TCR的核酸选择性地引入体内或离体的免疫细胞诸如T细胞中，从而完成了本发明。