[发明专利]具有增加的对于表皮生长因子受体的亲和力的抗体及其衍生片段

说明书

本发明提供了新型抗体(Ab)和片段，其以比Ab尼妥珠单抗更高的亲和力识别人表皮生长因子受体(EGFR)的胞外区，因此可以以更高的效率识别具有中等EGFR表达的细胞系。本发明还涉及包含所公开的Ab及片段作为活性成分的药用组合物，以及其在治疗具有EGFR表达的肿瘤中的用途。此外，所公开的Ab及片段，当与放射性同位素或荧光团相连接时，在定位具有EGFR的肿瘤中是有用的。另外，当与具有免疫学意义的蛋白质或蛋白质结构域相融合时，所述Ab及片段可以用于将免疫应答导向EGFR阳性肿瘤细胞。

技术领域

本发明涉及生物技术和医学领域，特别地涉及单克隆抗体(mAb)尼妥珠单抗的变体和衍生自其的抗原结合片段，其在重链可变区的CDR1和CDR2中具有突变并且以更高的亲和力识别人表皮生长因子受体(EGFR)的胞外区；以及其诊断和治疗应用。

现有技术

EGFR是一种跨膜糖蛋白，其具有与配体相结合的胞外区和有着酪氨酸激酶活性的胞内区。其配体包括：表皮生长因子(EGF)、双调蛋白、转化生长因子、β-动物纤维素(betacellulin)、表皮调节蛋白(epiregulin)和具有肝素结合位点的EGF样生长因子(Olayioye,M.等人,The EMBO Journal.19:3159-3167,2000；Yarden,Y.和Sliwkowski,M.,Nature Reviews.2:127-137,2001)。配体与受体的结合诱导在该受体的胞外区中的构象变化和安排，其引起该受体的二聚化和激活(Ogiso,H.等人,Cell.110:775-787,2002)。该受体牵涉对于上皮细胞的维持和存活做出贡献的各种不同的细胞过程。但是，由于过表达或组成性激活而导致的EGFR/EGF途径的失调促进肿瘤细胞增殖、侵入，并且这与许多恶性肿瘤的差的预后相关联(Yarden,Y.和Sliwkowski,M.,Nature Reviews.2:127-137,2001)。由于这样的原因，EGFR被认为是对于开发抗肿瘤疗法来说非常重要的肿瘤相关抗原(Ag)。

目前，市场上存在三种特异于EGFR的mAb：西妥昔单抗(Erbitux)、帕尼单抗(Vectibix)和尼妥珠单抗(TheraCIM)(Reichert,J.,mAbs.4:413-415,2012)，而其他七种处于I-III期临床试验中(Reichert,J.和Dhimolea,E.,Drug Discovery Today.17:954-963,2012)。它们特别地被设计成用于识别EGFR的胞外区，竞争性地抑制配体的结合和受体的二聚化，这将会抑制导致受体激活的自身磷酸化和信号传导级联(Burgess,A.等人,Molecular Cell,12:541-552,2003)。