[发明专利]增强FX活化的因子X结合物

说明书

本申请涉及独特的FX结合分子，例如可用于治疗血友病的抗体及其片段。

发明技术领域

本发明涉及凝血因子X结合物及其在治疗凝血病如血友病中的用途。

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背景

在凝血病患者中，诸如在患有A型和B型血友病的人中，凝血级联的各个步骤由于例如凝血因子的缺乏或存在不足而成为功能障碍的。凝血级联的一部分的这种功能障碍导致不充分的血液凝固以及潜在危及生命的出血，或对内部器官如关节的损伤。

凝血因子VIII(FVIII)缺乏症，常被称为A型血友病，是影响全世界约420,000人的先天性出血性病症，其中约有105,000人目前得到诊断。

A型血友病患者可以接受凝血因子替代疗法，如外源性FVIII。常规治疗由替代疗法组成，其作为出血发作的预防或按需治疗而提供。目前针对严重A型血友病患者的医疗标准是每周最多三次预防性静脉内注射血浆来源的FVIII或重组FVIII或其长效变体。

然而，这类患者具有生成针对此类外源因子的中和抗体(所谓的“抑制物”)的风险，从而使得先前有效的疗法变得无效。具有“抑制物”(即，针对FVIII的同种抗体)的A型血友病患者是部分先天性、部分获得性的凝血病的非限制性实例。已生成针对FVIII的“抑制物”的患者无法接受常规替代疗法，无论是预防还是按需治疗。

此外，外源性凝血因子只可以静脉内给药，这对于患者是相当不便和不适的。例如，婴儿和幼儿可能必须经手术向胸部静脉内插入静脉内导管，以确保静脉通路。这使他们具有很大的发生细菌感染的风险。

在出血的个体中，当血管外TF暴露于血液中活化的FVII(FVIIa)时，由组织因子/因子VIIa(TF/VIIa)复合物引发凝血。TF/VIIa复合物的形成导致因子X(FX)被激活为活化的因子Xa(FXa)，FXa与活化的因子V(FVa)一起生成有限量的凝血酶。

少量的凝血酶激活血小板。活化的血小板支持由活化的因子VIII(FVIIIa)和活化的因子IX(FIXa)组成的tenase复合物的装配和结合。tenase复合物是FX活化的非常有效的催化剂，而在该第二步中生成的FXa充当FVa/FXa凝血酶原酶复合物中的活性蛋白酶，该复合物负责最终的凝血酶爆发。凝血酶裂解纤维蛋白原以生成血纤蛋白单体，血纤蛋白单体聚合形成血纤蛋白网络，该网络密封泄漏的血管并终止出血。快速而广泛的凝血酶爆发是形成固态且稳定的血纤蛋白凝块的先决条件。

由凝血因子FVIII活性缺乏引起的FXa形成不足和凝血酶生成减少是A型血友病患者的出血素质的根本原因。

如前所述，FX向其酶活性形式FXa的蛋白水解转化可以通过包含FIXa及其辅因子FVIIIa的内在FX激活复合物来实现。辅因子结合使FIXa的酶活性增加约五个数量级，并且据信通过Scheiflinger等人(2008)J Thromb Haemost，6：315-322所概述的多种机制发生。值得注意的是，已发现FVIIIa使FIXa的构象得到稳定，FIXa具有增加的对FX的蛋白水解活性(Kolkman JA，Mertens K(2000)Biochemistry，39：7398-7405，T，Brandstetter H(2009)Biol Chem，390：391-400)。基于这一观察结果并意识到抗体是能够模拟多种蛋白质-蛋白质相互作用的通用结合蛋白质，Scheiflinger等人对激动性抗FIXa抗体进行了筛选，这些抗体的特征在于在磷脂表面和钙的存在下，但是在不存在天然辅因子FVIIIa的情况下，增强FIXa对FX的激活的能力。从对5280种杂交瘤上清液的筛选中，发现88种抗体表现出不同程度的FIXa激动活性。