[发明专利]哺乳动物特异性的生长缺陷的虫媒病毒

说明书

虫媒病毒携带改变的弗林蛋白酶切割位点，导致增强的对前体多聚蛋白(如prE2或prM)的切割。登革病毒粒子可在prM的第80‑130位氨基酸内具有氨基酸改变。寨卡病毒粒子可在弗林蛋白酶切割位点处和/或其周围的氨基残基处具有改变。该病毒可在昆虫细胞中产生。该病毒在哺乳动物细胞中不会形成子代病毒。

技术领域

本发明总体上涉及虫媒病毒，一小群在昆虫细胞和人类细胞中具有独特和不寻常的复制特性的少数病毒。本发明涉及突变的虫媒病毒及其作为免疫原的用途。在某些方面，本发明涉及改变的(altered)虫媒病毒，其在哺乳动物宿主细胞中不再复制，但继续在昆虫细胞中复制并可从中收获，仍继续在哺乳动物免疫系统中表达并向哺乳动物免疫系统呈递虫媒病毒抗原。

本发明涉及病毒的虫媒病毒科。虫媒病毒的一个基本特性是在哺乳动物和昆虫细胞中复制。许多虫媒病毒通过蜱或蚊子传播给哺乳动物。在一种分类方案下，虫媒病毒包括黄病毒属(Flavivirus)、甲病毒属(Alphavirus)和正布尼亚病毒属(Orthobunyavirus)。在另一种分类方案下，虫媒病毒包括布尼亚病毒科(Bunyaviridae)、黄病毒科(Flaviviridae)、呼肠孤病毒科(Reoviridae)和披膜病毒科(Togaviridae)。虫媒病毒的实例包括非洲猪瘟病毒(African Swine Fever virus)、蜱传脑炎病毒(Tick-borneEncephalitis virus)、裂谷热病毒(Rift Valley Fever virus)、科罗拉多蜱热病毒(Colorado Tick Fever virus)、马脑病病毒(Equine Encephalosis virus)、基孔肯雅病毒(Chikungunya virus)、登革热病毒(Dengue virus)(DV)、寨卡病毒(Zika virus)(ZV)和西尼罗病毒(West Nile virus)。

已经研究了黄病毒，部分是由于人类病理，参见例如GublerKuno,eds.:Dengueand Dengue Hemorrhagic Fever.Wallingford,CAB International,1997；和Porterfield；Exotic Viral Infections.Chapman and Hall Medical,London,1995。

黄病毒基因组由单个线性、单链、正义RNA组成。正链RNA感染合适的宿主细胞。总基因组可为10至11kb。没有3’多聚腺苷酸化。5’端有一个甲基化帽。

黄病毒基因组不含为宿主核糖体提供翻译起始位点的内部核糖体进入位点(IRES)。相反，黄病毒采用核糖体扫描开始蛋白质合成。

黄病毒病毒体可以是直径为40-65nm的球体。在脂质包膜下是直径约为25-30nm的二十面体衣壳包衣。

DV(1-5型)、黄热病病毒(Yellow Fever virus)、日本脑炎病毒(JapaneseEncephalitis virus)、蜱传脑炎病毒和西尼罗病毒是人类中具有重大发病率和死亡率的病原体。

例如，黄热病病毒能够引起流行病。在第一个链(cycle)中，病毒是通过非洲伊蚊(Aedes africanus)和其他伊蚊(Aedes mosquitoes)(在非洲)或通过Hemogogus蚊(在美洲)传播；猴子作为病库，一般而言，被感染的人类是那些进入森林和丛林深处，并暴露于这些媒介的人。在第二个链中，生活与人类关系密切的家蚊、埃及伊蚊(Aedes aegypti)可能直接将病毒传播给人类——该链中的唯一宿主。

黄病毒引起其他疾病，如墨累山谷脑炎(Murray Valley Encephalitis)、罗氏脑炎(Rocio Encephalitis)和波瓦生脑炎(Powassan Encephalitis)，以及最近在美洲观察到的西尼罗热和寨卡热。

几种黄病毒，包括导致绵羊神经疾病的羊跳跃病病毒(Louping Ill virus)、导致马脑炎的西尼罗病毒，以及也导致马脑炎以及猪死胎的日本脑炎病毒，是具有商业重要性的兽医病原体。