[发明专利]使用双水相系统来分离、纯化和/或浓缩短链核酸片段的方法

权利要求书

1.一种用于从样品中分离和浓缩250bp或更小的核酸片段的组合物，包含第一相组分和第二相组分，当所述组分溶解在水溶液中时能够形成双水相系统(ATPS)，其中第一相组分是在第一相中以5-20wt％的浓度溶解的聚合物，并且第二相组分是在第二相中以5-35wt％的浓度溶解的盐，其中当所述核酸片段与所述ATPS混合时，将所述片段浓缩在两相中的其中一相中。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述聚合物选自由聚亚烷基二醇、聚(氧化烯)聚合物、聚(氧化烯)共聚物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯基己内酰胺、聚乙烯基甲基醚、烷氧基化表面活性剂、烷氧基化淀粉、烷氧基化纤维素、烷基羟烷基纤维素、有机硅改性聚醚、聚N-异丙基丙烯酰胺、聚乙二醇、聚丙二醇、聚丙烯酸酯、右旋糖酐、UCONTM聚合物和FicollTM聚合物组成的组。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述盐选自由亲液盐、离液盐、具有三甲基铵、三乙基铵、三丙基铵、三丁基铵、四甲基铵、四乙基铵、四丙基铵或四丁基铵的阳离子和磷酸根、硫酸根、硝酸根、氯离子或碳酸氢根的阴离子的无机盐、氯化钠、磷酸钠、磷酸钾、硫酸钠、柠檬酸钾、硫酸铵、柠檬酸钠、醋酸钠和醋酸铵组成的组。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中所述聚合物是分子量为100-10,000Da的聚乙二醇。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述盐是磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、氯化钠、硫酸钠和磷酸钠中的一种或多种。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的组合物，其中当样品与组合物混合时，所得混合物进行相分离，并且250bp或更小的核酸片段浓缩在两相之一中。

7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述大于250bp的核酸片段和250bp或更小的片段浓缩在ATPS的不同相中。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的组合物，其中所述核酸片段选自由编码DNA、非编码DNA、信使RNA、核糖体RNA、微RNA和转移RNA组成的组。

9.根据权利要求1-7中任一项所述的组合物，其中所述核酸片段是无细胞DNA或循环肿瘤DNA。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的组合物，其中所述样品选自由血液、血浆、血清、脑脊髓液、尿液、唾液、粪便物质、泪液、痰液、鼻咽粘液、阴道分泌物和阴茎分泌物组成的组。

11.一种用于从样品中分离和浓缩250bp或更小的核酸片段的方法，包括：

a)制备权利要求1-7中任一项的组合物；

b)将步骤a)的组合物与含有所述样品的水溶液混合，允许所得混合物分配成两个相，其中核酸片段浓缩在两相中的一相中；和

c)从两相中的其中一相中分离核酸片段。

12.一种用于从样品中分离和浓缩250bp或更小的核酸片段的方法，包括：

a)制备包含第一相组分和第二相组分的组合物，当组分溶解在水溶液中时能够形成双水相系统(ATPS)，其中第一相组分是在第一相中以5-20wt％的浓度溶解的聚合物，并且第二相组分是在第二相中以15-25wt％的浓度溶解的盐；

b)将步骤a)的组合物与含有所述样品的水溶液混合，允许所得混合物分配成两个相，并将核酸片段浓缩在两相中的一相中；和

c)分离两相中浓缩有核酸片段的一相。

13.根据权利要求12所述的方法，进一步包括从步骤c)中的相中回收所述核酸片段。