[发明专利]评估G蛋白活化的系统和方法在审
| 申请号： | 201880063639.0 | 申请日： | 2018-10-15 |
| 公开（公告）号： | CN111164226A | 公开（公告）日： | 2020-05-15 |
| 发明（设计）人： | 克里斯蒂安·勒奎尔;米克尔·布维尔;维多利亚·卢卡莎娃;米雷耶·霍格;比利·布雷顿 | 申请（专利权）人： | 蒙特利尔大学;多曼治疗学公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6897 | 分类号： | C12Q1/6897;C12N15/12;C12N15/85;C12N5/10;C12Q1/02;G01N33/566 |
| 代理公司： | 成都超凡明远知识产权代理有限公司 51258 | 代理人： | 王晖;许洪洁 |
| 地址： | 加拿大*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 评估 蛋白 活化 系统 方法 | ||
1.一种以Gα蛋白亚基家族选择性方式测量G蛋白活化调节的系统，所述系统包括表达以下的细胞：
(i)第一组分，包括用生物发光供体分子或荧光接受体分子标记的Gα亚基相互作用多肽(GASIP)；
其中：
如果所述Gα蛋白亚基家族是Gi，则所述GASIP包含与Gi特异性结合的蛋白结构域；
如果所述Gα蛋白亚基家族是Gq，则所述GASIP包含与Gq特异性结合的蛋白结构域；和
如果所述Gα蛋白亚基家族是G12/13，则所述GASIP包含与G12/13特异性结合的蛋白结构域；以及
(ii)第二组分，包括用生物发光供体分子或荧光接受体分子标记的质膜(PM)靶向部分、胞内体靶向部分或高尔基体靶向部分；
其中，如果所述GASIP用所述荧光接受体分子标记，则所述PM靶向部分、胞内体靶向部分或高尔基体靶向部分用所述生物发光供体分子标记，以及如果所述GASIP用所述生物发光供体分子标记，则所述PM靶向部分、胞内体靶向部分或高尔基体靶向部分用所述荧光接受体分子标记。
2.根据权利要求1所述的系统，其中，所述与Gi特异性结合的蛋白结构域是Rap1GAP的G蛋白结合结构域或G蛋白信号转导调节物(RGS)蛋白的G蛋白结合结构域。
3.根据权利要求2所述的系统，其中，所述GASIP包含所述Rap1GAP的G蛋白结合结构域。
4.根据权利要求3所述的系统，其中，所述Rap1GAP的G蛋白结合结构域包含Rap1GAP(SEQ ID NO：8)的1至442位的残基或其变体，其中在位置437、439和441的一个或多个丝氨酸残基突变或缺失。
5.根据权利要求4所述的系统，其中，所述Rap1GAP的G蛋白结合结构域包含Rap1GAP的1至420位或1至436位的残基。
6.根据权利要求4所述的系统，其中，在位置437、439和441的所有三个丝氨酸残基都突变。
7.根据权利要求4或6所述的系统，其中，所述丝氨酸残基被丙氨酸替换。
8.根据权利要求2所述的系统，其中，所述GASIP包含RGS蛋白的G蛋白结合结构域。
9.根据权利要求8所述的系统，其中，所述RGS蛋白是RGS17、RGS19或RGS20。
10.根据权利要求9所述的系统，其中，所述G蛋白结合结构域包含RGS17(SEQ ID NO：17)的64至210位的残基、RGS19(SEQ ID NO：18)的70-217位的残基或RGS20(SEQ ID NO：19)的242-388位的残基。
11.根据权利要求1所述的系统，其中，所述与Gq特异性结合的蛋白结构域是P63RhoGEF的G蛋白结合结构域或GRK2的G蛋白结合结构域。
12.根据权利要求11所述的系统，其中，所述GASIP包含所述P63RhoGEF的G蛋白结合结构域。
13.根据权利要求12所述的系统，其中，所述P63RhoGEF的G蛋白结合结构域包含P63RhoGEF(SEQ ID NO：25)的295至502位的残基。
14.根据权利要求11所述的系统，其中，所述GASIP包含所述GRK2的G蛋白结合结构域。
15.根据权利要求14所述的系统，其中，所述GRK2的G蛋白结合结构域包含GRK2(SEQ IDNO：27)的30至203位的残基。
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