[发明专利]细胞外囊泡的固定和保留

权利要求书

1.一种制备生物流体的固定样本的方法，所述方法包括使含有细胞外囊泡的生物流体与水溶性碳二亚胺或卤化氰接触以固定生物流体的样本并保留细胞外囊泡。

2.权利要求1所述的方法，还包括在使所述生物流体与水溶性碳二亚胺或卤化氰接触之前、之后或同时，使所述生物流体与一种或多种另外的固定剂接触。

3.权利要求2所述的方法，其中所述另外的固定剂包括含醛固定剂。

4.权利要求2所述的方法，其中所述另外的固定剂包括以下的一种或多种：戊二醛、多聚甲醛、乙二醇二(甲基)丙烯酸酯、乙二醇二丙烯酸酯、二(乙二醇)二丙烯酸酯、四(乙二醇)二丙烯酸酯、乙二醇二甲基丙烯酸酯、二(乙二醇)二甲基丙烯酸酯、三(乙二醇)二甲基丙烯酸酯、N,N’-亚甲基双(丙烯酰胺)、N,N’-(1,2-二羟基亚乙基)双丙烯酰胺、无甲醛的交联剂、N-(1-羟基-2,2-二甲氧基乙基)丙烯酰胺、二乙烯基苯、福尔马林固定剂、甲醛钙、甲醛盐水、未缓冲的锌福尔马林、Zenker固定剂、Helly固定剂、B-5固定剂、Bouin溶液、Hollande溶液、Gendre溶液、Clarke溶液、Carnoy溶液、Methacarn、酒精福尔马林和福尔马林醋酸酒精。

5.权利要求1所述的方法，其中所述细胞外囊泡包括：外泌颗粒、外泌体、多囊泡体、腔内囊泡(ILV)、多囊泡内体(MVE)、癌小体、大小为20-10,000nm的微囊泡、凋亡体和来源于内体或质膜的囊泡。

6.权利要求1所述的方法，其中所述生物流体包括临床样本、来自用临床药物治疗的患者的临床样本、癌症样本、肿瘤样本、玻璃体液或房水，或血液制品。

7.权利要求1所述的方法，其中所述生物流体包括癌症或癌症前期组织的生物标志物。

8.权利要求1所述的方法，其中所述细胞外囊泡是生物标志物。

9.权利要求1所述的方法，其中所述生物流体包括脑脊液或乳头抽吸液。

10.权利要求1所述的方法，其中所述水溶性碳二亚胺包括1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺或1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺和5-(乙硫基)-1H-四唑的缓冲混合物。

11.权利要求1所述的方法，其中所述卤化氰包括溴化氰、氟化氰、氯化氰或碘化氰。

12.权利要求1所述的方法，其中所述细胞外囊泡具有20纳米至10,000nm的尺寸。

13.一种生物流体的固定样本，其根据权利要求1-12中任一项制备。

14.权利要求1-12任一项中定义的水溶性碳二亚胺或卤化氰在制备生物流体的固定样本中的用途，所述固定生物样本用于通过对所述样本成像来检测所述生物流体中的细胞外囊泡。

15.权利要求14所述的用途，其中所述成像通过以下来进行：透射电子显微术、扫描电子显微术、冷冻电子显微术、双目立体显微术、宽场显微术、偏振显微术、相差显微术、多光子显微术、微分干涉相差显微术、荧光显微术、激光扫描共焦显微术、多光子激发显微术、射线显微术、超声显微术、比色分析、化学发光分析、分光光度法、正电子发射断层扫描、计算机断层扫描和磁共振成像。

16.权利要求1-12任一项中定义的水溶性碳二亚胺或卤化氰在制备生物流体的固定样本中的用途，所述固定生物样本用于检测样本中的生物标志物。

17.权利要求16所述的用途，其中所述细胞外囊泡是生物标志物。