[发明专利]针对颗粒状角膜变性症的基因治疗药物

权利要求书

1.引导RNA分子，其与下述靶序列杂交，所述靶序列包含与颗粒状角膜变性症有关的转化生长因子β诱导(TGFBI)基因的突变位点。

2.如权利要求1所述的引导RNA分子，其中，TGFBI基因的突变为点突变。

3.如权利要求2所述的引导RNA分子，其中，点突变为TGFBI蛋白的第124位处的氨基酸取代。

4.如权利要求3所述的引导RNA分子，其中，氨基酸取代选自由R124H、R124C及R124L组成的组。

5.如权利要求1～4中任一项所述的引导RNA分子，其中，颗粒状角膜变性症为颗粒状角膜营养不良2型(GCD2)。

6.如权利要求1～5中任一项所述的引导RNA分子，其包含引导序列，所述引导序列能与由与TGFBI基因的前间隔序列邻近基序(PAM)序列的上游侧相邻的22个碱基的序列构成的靶序列杂交。

7.如权利要求6所述的引导RNA分子，其中，PAM序列由CGG构成。

8.如权利要求6或7所述的引导RNA分子，其中，引导序列包含与靶序列互补的、由至少17～18个碱基构成的区域。

9.如权利要求6～8中任一项所述的引导RNA分子，其中，引导序列由以腺嘌呤或鸟嘌呤起始的22个碱基的序列构成。

10.如权利要求6～9中任一项所述的引导RNA分子，其中，引导序列具有序列号1的碱基序列。

11.如权利要求6～10中任一项所述的引导RNA分子，其中，引导序列与反式激活crRNA(tracrRNA)序列结合。

12.核酸，其编码权利要求1～11中任一项所述的引导RNA分子。

13.载体，其表达权利要求1～11中任一项所述的引导RNA分子。

14.如权利要求13所述的载体，其中，引导RNA的表达由U6启动子驱动。

15.如权利要求14所述的载体，其中，引导RNA和U6启动子位于相同或不同的载体上。

16.如权利要求14所述的载体，其中，引导RNA与U6启动子以能在相同的载体上发挥作用的方式连接。

17.试剂盒，其包含权利要求13～16中任一项所述的载体、和作为HDR的模板供体的ssODN分子～。

18.如权利要求17所述的试剂盒，其中，ssODN具有将点突变取代为相当于野生型的氨基酸的碱基的敲入序列。

19.如权利要求18所述的试剂盒，其中，相当于野生型的氨基酸的碱基为CGT或CGC。

20.如权利要求18或19所述的试剂盒，其中，敲入序列具有限制性内切酶位点。

21.如权利要求20所述的试剂盒，其中，相当于野生型的氨基酸的碱基为CGT，限制性内切酶位点为BsiWI位点。

22.如17～21中任一项所述的试剂盒，其中，ssODN还在敲入序列的两端具有与切割位点的两端同源的50个碱基的同源臂。

23.如权利要求17～22中任一项所述的试剂盒，其中，ssODN分子具有序列号2的碱基序列。