[发明专利]纯化抗体的方法

说明书

公开了一种分离抗体的方法。所述方法包括使疏水性螯合剂、非离子型去污剂和金属离子接触，以产生包含所述疏水性螯合剂、所述去污剂和所述金属离子的聚集体；和在使得所述抗体能够分配至所述聚集体中的条件下使所述聚集体与包含所述抗体的培养基接触。还公开了用于分离所述抗体的试剂盒。

发明领域和背景

本发明在其一些实施方案中涉及用于纯化抗体的方法和试剂盒。

单克隆抗体(mAb)为目前最常用作治疗剂的重组蛋白；其为2012年美国最大的生物制品销售类别。其表达水平从每升低至毫克到几克浓度的显著增加以及其中一些将需要的几百千克到吨的数量，对能够有效地从复杂混合物中捕获mAb的工业纯化方法提出持续的挑战。这通常经ProA色谱作为初始捕获步骤来实现，通常导致高回收率(~95%)、纯度(>95%)，同时去除大部分宿主DNA、病毒污染物和浸出的ProA。

这些卓越的特征使ProA色谱成为抗体制造的金标准。然而，由于ProA树脂相对于非亲和性聚合物载体(例如离子交换剂)成本高昂，因此有动机开发更经济的替代品。当考虑到目前和未来的全球生物技术需求(即每年许多吨纯化的mAb)时，这种动机进一步证明是合理的，所述需求代表数百种正在开发的不同治疗性mAb，所有这些mAb目的在于靶向各种癌症、自身免疫和炎性障碍。

有人认为，ProA以及色谱策略的使用通常代表mAb工业纯化的固有“生产力瓶颈”，其可占总制造成本的高达80%，因此使得不需要以下的任何抗体捕获方法成为对于未来制药需求的有吸引力的备选方法：(a) ProA作为配体和/或(b) 色谱法作为主要捕获步骤。

背景技术包括Patchornick et al., Bioconjugate Chemistry, 2013, Volume24, 1270-1275页; Guse et al., J. Chromatogr A. (1994) 661, 13-23; Manske etal., J. Immunol Methods (1997) 2008, 65-73; Follman and Fahrner J. Chromatogr A. (2004) 1024, 79-85和Ghosh and Wang, J. Chromatogr A. (2006) 1107, 104-109。

发明概述

发现了抗体纯化的新概念。人类免疫球蛋白G (hIgG)和小鼠IgG几乎定量(通过密度测定为~95%)分配至非离子型去污剂、金属离子和疏水性螯合剂的聚集体中，而大部分(通过密度测定为> 85%)非IgG蛋白(即杂质)被拒绝。该过程为高度特异性的，因为其依赖于螯合剂和金属的存在。可提取吸附或包埋在聚集体内的抗体而不会伴随发生聚集体的溶解并导致更纯的IgG制备物(通过密度测定为~95%)。该过程的总产率包括：Ig分配和提取范围在~40-46%之间(通过密度测定)。圆二色性光谱(CD)证明保持了提取的hIgG的二级结构。

本发明一些实施方案的一个方面提供一种分离抗体的方法，方法包括：

(a) 使疏水性螯合剂、非离子型去污剂和金属离子接触，以产生包含疏水性螯合剂、所述去污剂和金属离子的聚集体；和

(b) 在使得抗体能够分配至聚集体中的条件下使聚集体与包含抗体的培养基接触，从而分离抗体。

本发明一些实施方案的一个方面提供一种试剂盒，其包含疏水性螯合剂、非离子型去污剂、pH在3-6之间的缓冲液和金属离子。

本发明一些实施方案的一个方面提供一种试剂盒，其包含疏水性螯合剂、聚山梨酯表面活性剂和金属离子。

根据本发明的一些实施方案，培养基包含细胞裂解物。

根据本发明的一些实施方案，细胞裂解物为全细胞裂解物。