[发明专利]制备伊美司他(imetelstat)的改良方法

权利要求书

1.一种合成下式的N3'→P5'硫代氨基磷酸酯寡核苷酸伊美司他(imetelstat)的方法，

所述方法包括

a)提供连接到式(A)的固相支持物的第一个3'-氨基保护的核苷酸，其中

PG是酸不稳定保护基；

b)使受保护的3'-氨基脱保护，形成游离3'-氨基；

c)使所述游离3'-氨基与式(B'_n)的受保护的3'-氨基核苷-5'-O-氰基乙基-N,N-二异丙基氨基亚磷酰胺单体反应，其中n＝2的B'_n为受保护的A，形成核苷间N3'→P5'-亚磷酰胺键；

d)使用酰基二硫化物硫化核苷间亚磷酰胺基团，形成N3'→P5'硫代磷酰胺；

e)按连续顺序重复11次脱保护步骤b)、偶合步骤c)，其中式(B'_n)的3'-氨基核苷-5'-O-氰基乙基-N,N-二异丙基氨基-亚磷酰胺单体受到保护，其中除了当B为胸腺嘧啶时，单体(B'_n)中的核苷碱基B'是受保护的B，并且其中B_n连续为相应的11个偶合步骤中的核碱基B₃至B₁₃，和硫化步骤d)；

f)去除酸不稳定的保护基PG；和

g)使伊美司他从固相支持物脱保护和裂解；

其特征在于在反应步骤a)至e)的任何一个中均不进行额外的加帽步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其中伊美司他进一步转化成其钠盐。

3.根据权利要求1或权利要求2中任一项所述的方法，其中所述酰基二硫化物选自二苯甲酰基二硫化物、双(苯乙酰基)二硫化物(PADS)、双(4-甲氧基苯甲酰基)二硫化物、双(4-甲基苯甲酰基)二硫化物、双(4-硝基苯甲酰基)二硫化物和双(4-氯苯甲酰基)二硫化物。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述酰基二硫化物是PADS。

5.根据权利要求4所述的方法，其中PADS溶解在3-甲基吡啶或2,6-二甲基吡啶与选自乙腈、甲苯、1-甲基吡咯烷酮和四氢呋喃的共溶剂的混合物中。

6.根据权利要求5所述的方法，其中PADS溶解在2,6-二甲基吡啶与乙腈的混合物中。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述PADS溶液在使用前老化4至14小时。

8.根据前述权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述酸不稳定基团PG选自三苯基甲基、对茴香基二苯基甲基和二-对茴香基苯基甲基。

9.根据前述权利要求1-7中任一项所述的方法，其中通过用酸性溶液处理去除所述酸不稳定保护基PG。

10.根据前述权利要求1-7中任一项所述的方法，其中式(B'_n)的单体中的腺嘌呤、胞嘧啶和鸟嘌呤碱基上的碱不稳定保护基选自乙酰基、苯甲酰基、异丁酰基、二甲基甲脒基和二苄基甲脒基。

11.根据前述权利要求1-7中任一项所述的方法，其中使用选自四唑、5-(乙硫基)-1H-四唑、5-(4-硝基-苯基)四唑、5-(2-噻吩基)-1H-四唑、三唑和吡锭氯化物的活化剂进行所述偶合步骤c)。

12.根据前述权利要求1-7中任一项所述的方法，其中通过用碱性溶液处理进行步骤g)。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述碱性溶液是溶解在乙腈中的二乙胺或溶解在醇中的氨水，或两者的组合。