[发明专利]治疗自身免疫性疾病的PantId

说明书

B和T细胞经常在自身免疫性疾病中靶向检查点受体及其同源配体，其中这些适应性免疫应答可能显著促进潜在的免疫病理。本文描述了靶向检查点受体及其配体的自身反应性B细胞的克隆消除的新技术。该技术的一个实施方案是与效应子结构域的检查点受体或配体胞外结构域分子嵌合体，其能够诱导B细胞凋亡、坏死和/或耐受/无反应：在本文中，该技术被称为PantId(多克隆抗独特型)。在其他实施方案中，该技术还包括与免疫调节细胞因子的效应分子嵌合体。还描述了新型的凋亡效应子。还描述了鉴定检查点受体/配体自身反应性B细胞反应、构建PantId及其体外和体内应用的方法。

发明背景

正常致耐受机制自身免疫性疾病的特征是耐受性的逐渐下降,通常是进行性下降,以及通常阻止对内源宿主蛋白的适应性免疫反应的致耐受机制。在正常B和T细胞发育过程中，自身反应性细胞分别在骨髓和胸腺中被消除，对宿主组织和蛋白质产生“中央耐受性”。对于B细胞，高亲和力B细胞受体(BCR)对骨髓(B细胞发育的位置)中存在的细胞表面蛋白的表达导致细胞凋亡。另外，对无处不在的可溶性配体有应答的B细胞因无反应性而失活。对于T细胞，在胸腺(T细胞发育的位置)中也发生类似的过程：T细胞受体(TCR)对MHC-I或MHC-II复合物中存在的自身抗原肽以高亲和力应答的T细胞也因细胞凋亡而删除。对于所述肽-MHC复合物具有中等或低亲和力的T细胞，这些细胞可发育为调节性T细胞(Tregs)，其有助于维持外周耐受性；或者，这些细胞可能变得无反应性或发生凋亡。

外周耐受性是指一套机制，其阻止对中枢免疫系统之外的宿主蛋白的适应性免疫反应。如前所述，这些包括中枢产生的Treg细胞，其通过表达对自身抗原肽-MHC复合物的免疫抑制效应子来帮助维持外周耐受性。Treg抑制的机制仍在确定中，但包括可溶性免疫抑制效应子和细胞接触特异性免疫抑制剂的分泌。在前一种机制中，Treg细胞分泌TGF-β、IL-10、腺苷(由CD39和CD73产生)和IL-35，从而产生可以阻止T细胞和B细胞活化的免疫抑制环境，并产生耐受性APC¹。在细胞接触机制中，CTLA-4、PD-L1、LAG-3、膜结合的TGF-β以及穿孔素和颗粒酶有助于免疫抑制¹。同样在外周，自身反应性T细胞可以通过耐受性APC(例如BTLA⁺树突状细胞)被凋亡或转化为外周Treg²。这些外周Tregs(pTregs)通过许多针对中枢或胸腺Tregs(cTregs或tTregs)描述的机制促进了外周耐受性。

外周耐受性的另外机制是对T细胞活化进行共同刺激的一般要求。当T细胞将其同源抗原作为肽-MHC复合物结合时，取决于共刺激的存在，有两种可能的结果：在共刺激激动剂的存在下，例如CD80或CD86与T细胞表达的CD28结合，T细胞变成激活，导致增殖和效应功能的参与；在另一种情况下，当缺乏共刺激或当T细胞代替共刺激信号或与共刺激信号结合而接受抑制信号时，T细胞可能发生凋亡、无反应性或转化为pTreg。对于B细胞，对于T细胞依赖性B细胞激活存在类似的共刺激要求，其中T细胞表达的CD40L必须与B细胞表达的CD40结合以进行B细胞激活。虽然对共刺激的这些规范模式(例如CD28和CD40)进行了最详尽的描述，但最近已阐明了其他共刺激剂和共抑制剂：这类受体及其配体(其累积决定抗原参与的结果)被指为免疫检查点受体或配体：目前，这些免疫检查点包括15个信号轴(图1)。