[发明专利]水溶性大麻素在植物系统中高水平体内生物合成和分离

权利要求书

1.一种用于在大麻悬浮细胞培养物中高水平产生水溶性大麻素的增强的体内方法，包括以下步骤：

在遗传修饰的大麻细胞中表达编码异源细胞色素P450的核苷酸序列；

在遗传修饰的大麻细胞中表达编码异源P450氧化还原酶的核苷酸序列；

在遗传修饰的大麻细胞中表达编码糖基转移酶的核苷酸序列；

在遗传修饰的大麻细胞中表达编码异源ABC转运蛋白的核苷酸序列；

在遗传修饰的大麻细胞中表达编码myb转录因子的核苷酸序列；和

在遗传修饰的大麻细胞中表达编码异源过氧化氢酶的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述大麻悬浮细胞培养物包括Cannabis sativa悬浮细胞培养物。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述异源细胞色素P450羟化大麻素以形成羟基化大麻素和/或氧化羟化大麻素以形成大麻素羧酸。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述异源细胞色素P450被鉴定为SEQ ID NO.1或与SEQ ID NO.1至少80％相同的序列。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述异源P450氧化还原酶促进从烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)到所述细胞色素P450的电子转移。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述异源P450氧化还原酶被鉴定为SEQ ID NO.3或与SEQ ID NO.3至少80％相同的序列。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述糖基转移酶是异源糖基转移酶。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述异源糖基转移酶被鉴定为SEQ ID NO.7或与SEQ ID NO.7至少80％相同的序列。

9.根据权利要求7所述的方法，其中所述异源糖基转移酶是来自烟草或本生烟的糖基转移酶。

10.根据权利要求9所述的方法，其中来自烟草的糖基转移酶选自SEQ ID NO.27、SEQID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、或与所列序列中的任一个至少80％相同的序列、或来自本生烟的同源序列。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述异源ABC转运蛋白被鉴定为SEQ ID NO.9或与SEQ ID NO.9至少80％相同的序列。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述myb转录因子是来自大麻或其直系同源物的内源性mybl2转录因子。

13.根据权利要求12所述的方法，其中来自大麻的内源性myb转录因子选自SEQ IDNO.11、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.44、或与所列序列中的任一个至少80％相同的序列。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述异源过氧化氢酶选自SEQ ID NO.13、或SEQID NO.15、或与所列序列中的任一个至少80％相同的序列。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述水溶性大麻素包含具有一个或多个糖苷部分的糖基化大麻素。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述水溶性大麻素包括乙酰化大麻素。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述乙酰化大麻素包含O乙酰基糖苷大麻素形式。