[发明专利]BP005毒素基因及其使用方法

说明书

提供了赋予细菌、植物、植物细胞、组织和种子杀有害生物活性的组合物和方法。提供了包含毒素多肽的编码序列的组合物。编码序列可在用于在植物和细菌中转化和表达的DNA构建体或表达盒中使用。组合物还包含转化的细菌、植物、植物细胞、组织和种子。特别地，提供了分离的毒素核酸分子。另外，涵盖了对应于多核苷酸的氨基酸序列，以及特异性结合这些氨基酸序列的抗体。具体地，本发明提供分离的核酸分子，这些分离的核酸分子包含：编码任一SEQ ID NO:1‑40、42、43、45‑48、50、51、52、54、56、58‑64、66或67所示的氨基酸序列的核苷酸序列，或任一SEQ ID NO:69‑106所示的核苷酸序列，以及其变体和片段。

相关申请的交叉引用

本申请要求2017年1月18日提交的美国临时申请序列号62/447,592的权益，其内容通过引用完整并入本文中。

对以电子方式提交的序列表的引用

经由EFS-Web作为ASCII格式的序列表以电子方式提交序列表的正式文本，其中文件名称是“APA176001SEQLIST_ST25.txt”，在2018年1月16日创建并且具有100千字节的大小，并与本说明书同时提交。在此ASCII格式的文档中含有的序列表是本说明书的一部分并且通过引用以其整体并入本文作为参考。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域。提供的是编码杀有害生物蛋白质的新基因。这些蛋白质和编码它们的核酸序列在制备杀有害生物配制品和在生产转基因的抵抗有害生物的植物中有用。

背景技术

有害昆虫是世界商业重要农作物受损的主要原因。目前旨在减少作物损失的策略主要依靠化学杀有害生物剂。转基因作物的开发和培养使全世界的农业发生了革命。2014年，全球昆虫保护作物培养面积估计为78.8百万公顷。第一代抗虫转基因植物基于来自苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)(Bt)的杀昆虫蛋白。正在开发的第二代抗虫植物包括Bt蛋白和非Bt蛋白，其具有新颖的作用模式和针对昆虫有害生物的不同活性谱。此外，自从引入表达这些毒素的转基因作物以来，通常对杀昆虫Bt蛋白具有抗性的刺穿/吸吮昆虫已成为主要有害生物。表达Bt杀昆虫蛋白的作物对经济上重要的鞘翅目和鳞翅目有害生物提供了极好的控制，但在控制半翅目有害生物方面无效。

因为昆虫可导致破坏且通过控制昆虫有害生物所带来的产量提高，所以不断需要发现新形式的杀有害生物毒素。

发明概述

提供了赋予细菌、植物、植物细胞、组织和种子杀有害生物活性的组合物和方法。组合物包括编码杀有害生物和杀昆虫多肽的序列的核酸分子、包含那些核酸分子的载体，和包含所述载体的宿主细胞。组合物还包括杀有害生物的多肽序列和针对那些多肽的抗体。核苷酸序列可以用于在生物体(包括微生物和植物)中用以转化和表达的DNA构建体或表达盒中。所述核苷酸或氨基酸序列可以是已设计为在生物体中表达的合成序列，该生物体包括但不限于微生物或植物。组合物还包含含有本发明的核苷酸序列的细菌、植物、植物细胞、组织和种子。

具体地，提供编码杀有害生物蛋白质的分离的、重组的和嵌合的核酸分子。另外，包括与所述杀有害生物蛋白质相对应的氨基酸序列。具体地，本发明提供分离的、重组的或嵌合的核酸分子，其包含：编码SEQ ID NO:1-40、42、43、45-48、50、51、52、54、56、58-64、66、或67中任一项显示的氨基酸序列的核苷酸序列，或SEQ ID NO:69-106中所示的核苷酸序列，以及其生物学活性变体或片段。还涵盖与本发明的核苷酸序列互补，或与本发明的序列或其互补体杂交的核苷酸序列。还提供包含以下的载体、宿主细胞、植物和种子：本发明的核苷酸序列，或编码本发明氨基酸序列的核苷酸序列，以及其生物学活性变体或其片段。

提供用于产生本发明的多肽，和使用那些多肽来控制或杀伤鳞翅目、半翅目、鞘翅目、线虫或双翅目有害生物的方法。还包括用于在样品中检测本发明的核酸和多肽的方法和试剂盒。