[发明专利]达贝泊汀组合物的制造方法和达贝泊汀产生细胞的培养方法

权利要求书

1.一种达贝泊汀组合物的制造方法，其包括下述步骤1和步骤2，

步骤1：在添加有植物来源的蛋白水解物的培养基中对达贝泊汀生产细胞进行培养而得到培养液的步骤；

步骤2：从步骤1中得到的培养液中回收达贝泊汀组合物的步骤。

2.一种抑制了唾液酸从达贝泊汀分子脱离的达贝泊汀组合物的制造方法，其包括下述步骤1和步骤2，

步骤1：在添加有植物来源的蛋白水解物的培养基中对达贝泊汀生产细胞进行培养而得到培养液的步骤；

步骤2：从步骤1中得到的培养液中回收达贝泊汀组合物的步骤。

3.如权利要求1或2所述的制造方法，其中，步骤1中得到的培养液中的每一分子达贝泊汀含有12～22个唾液酸的达贝泊汀组合物的67％以上为每一分子达贝泊汀含有18～22个唾液酸的达贝泊汀组合物。

4.如权利要求1～3中任一项所述的制造方法，其中，步骤1中得到的培养液中的每一分子达贝泊汀含有12～22个唾液酸的达贝泊汀组合物的55％以上为每一分子达贝泊汀含有19～22个唾液酸的达贝泊汀组合物。

5.如权利要求1～4中任一项所述的制造方法，其中，步骤1中得到的培养液中的每一分子达贝泊汀含有12～22个唾液酸的达贝泊汀组合物的44％以上为每一分子达贝泊汀含有20～22个唾液酸的达贝泊汀组合物。

6.如权利要求1～5中任一项所述的制造方法，其中，步骤1中得到的培养液中的每一分子达贝泊汀含有12～22个唾液酸的达贝泊汀组合物的18％以上为每一分子达贝泊汀含有22个唾液酸的达贝泊汀组合物。

7.如权利要求1～6中任一项所述的制造方法，其中，步骤1中得到的培养液中的达贝泊汀组合物的总产量比在不含有植物来源的蛋白水解物的培养基中培养时高。

8.如权利要求1～7中任一项所述的制造方法，其中，达贝泊汀生产细胞为在宿主细胞中导入含有编码达贝泊汀的基因的载体而得到的转化细胞。

9.如权利要求8所述的制造方法，其中，宿主细胞为动物细胞。

10.如权利要求9所述的制造方法，其中，动物细胞为中国仓鼠卵巢(CH0)细胞、小鼠黑色素瘤(NS0)细胞或小鼠骨髓瘤(SP2/0)细胞、或者来源于这些细胞的细胞。

11.如权利要求1～10中任一项所述的制造方法，其中，添加植物来源的蛋白水解物的培养基为完全合成培养基。

12.如权利要求1～11中任一项所述的制造方法，其中，向培养基中添加的植物来源的蛋白水解物的浓度为1～5g/l。

13.如权利要求1～12中任一项所述的制造方法，其中，植物来源的蛋白水解物为来源于大豆的蛋白水解物。

14.如权利要求1～13中任一项所述的制造方法，其中，进一步包括对达贝泊汀组合物进行纯化的纯化步骤。

15.如权利要求14所述的制造方法，其中，纯化步骤为选自阴离子交换色谱、反相色谱或凝胶过滤中的至少一种。

16.如权利要求1～15中任一项所述的制造方法，其中，所得到的达贝泊汀组合物是每一分子含有平均18个以上的唾液酸的达贝泊汀。

17.一种达贝泊汀生产细胞的培养方法，其包括：在添加有植物来源的蛋白水解物的培养基中对达贝泊汀生产细胞进行培养，使达贝泊汀组合物分泌到培养液中。