[发明专利]检测疏嘌呤类药物相关基因SNP的试剂盒和方法

说明书

本发明公开了一种检测疏嘌呤类药物相关基因SNP的试剂盒和方法，涉及基因多态性检测技术领域。该试剂盒包括引物组合1‑引物组合4中的一种或多种的组合。采用该试剂盒可以同时对2个疏嘌呤类药物相关基因的4个SNP位点的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，SNP位点之间无干扰等特点。

技术领域

本发明涉及基因多态性检测技术领域，具体而言，涉及一种检测疏嘌呤类药物相关基因SNP的试剂盒和方法。

背景技术

疏嘌呤属于抑制嘌呤合成途径的细胞周期特异性药物，化学结构与次黄嘌呤相似，因而能竞争性地抑制次黄嘌呤的转变过程。疏嘌呤类药物主要含有3种：硫唑嘌呤、疏基嘌呤和6-硫鸟嘌呤，在临床上适用于绒毛膜上皮癌、恶性葡萄胎、急性淋巴细胞白血病及急性非淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病的急变期。

TPMT(硫嘌呤甲基转移酶)，又称疏基嘌呤甲基转移酶或疏嘌呤甲基转移酶，是疏嘌呤类药物的代谢中最主要的酶之一，可以在这类化合物的硫原子上增加一个甲基，进而使药物灭活。TPMT基因的缺陷会让人体无法将疏嘌呤类药物灭活，使得未代谢的药物在体内大量累积，从而引起严重甚至致命的骨髓抑制，表现出贫血、血小板减少症和白细胞减少症。

NUDT15是一种水解酶，可使疏嘌呤药物的活性代谢物TGTP和TGDP脱磷酸，进而防止其掺入DNA并负面影响疏嘌呤药物的细胞毒性作用。

研究发现，NUDT15的总体突变率为2.6％，而东亚人群中突变频率达到10.5％。TPMT具有8组等位基因，数据显示，90％的人TPMT酶活性为正常活性，10％的人为中等活性，约0.3％的人该酶表现为低或无活性，其中TPMT*2、TPMT*3C变异占了中等及以下活性人群的95％，是临床疏嘌呤药物使用前必检的基因位点。因此为取得最佳治疗效果，医生应依据患者的基因型资料选取合适的精神类药物，即根据个体遗传特征(基因型)，选择有效的治疗方案。实现“基因导向型”个体化药物治疗和“量体用药”。

传统的检测方法主要为sanger测序、片段分析或是单碱基延伸技术，每个反应仅检测1个或是几个基因位点。其存在检测效率低，通量低的问题。传统的检测方法完成一次检测周期较长，需要实验人员较多；同时检测配套试剂中，需要荧光标记引物或ddNTP或长片段引物，成本较高。由于药物代谢基因在基因组中存在有较多重复序列，传统的检测方法对基因难扩增、难检测。传统的检测方法实验流程长，样品孔反复开盖、加样次数多；同时同一反应内多个基因位点竞争性扩增，相关干扰大。传统检测方法得到的原始结果均无法在仪器上直观显示检测结果，需要实验员自行设置参数分析，结果判读复杂。传统的检测方法需要用到荧光标记的引物或ddNTP或是长片段引物，在室温或是光照条件下暴露较长时间，或是反复冻融次数过多极易导致检测失败，失败率高。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测疏嘌呤类药物相关基因SNP的试剂盒，采用该试剂盒可以同时对2个疏嘌呤类药物相关基因的4个SNP位点的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，SNP位点之间无干扰等特点。

本发明的另一目的在于提供一种检测疏嘌呤类药物相关基因SNP的方法，该方法可以同时对2个疏嘌呤类药物相关基因的4个SNP位点的多态性进行检测，具有成本低、结果判读简单，SNP位点之间无干扰等特点。

本发明是这样实现的：

一方面，本发明提供了一种检测疏嘌呤类药物相关基因SNP的试剂盒，其包括引物组合1-引物组合4中的一种或多种的组合；

其中，引物组合1包括：SEQ ID NO.1-2所示的扩增引物和SEQ ID NO.9所示的检测引物；

引物组合2包括：SEQ ID NO.3-4所示的扩增引物和SEQ ID NO.10所示的检测引物；