[发明专利]用于保存人类唾液中核酸完整性的试剂组合物和方法

说明书

本发明提供了一种用于保存人类唾液中核酸完整性的试剂组合物及其应用和方法。试剂组合物包括尿素、十二烷基硫酸钠、反式‑1，CDTA、Tris‑HCl、抗坏血酸钠、对羟基苯甲酸丙酯、重氮烷基咪唑脲、乙醇、蔗糖和蛋白酶K。将所述试剂组合物与人体唾液混合均匀后常温保存。本发明所述试剂组合物和保存方法可以抑制核酸酶活性，避免其受到外界微生物的污染或自身氧化，从而保证基因组DNA的纯度和完整度，而且保存时间长，适用保存温度广，能够确保唾液样本在各采集地之间运输过程中的稳定性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更为具体的是涉及用于保存人类唾液中核酸完整性的试剂组合物和方法。

背景技术

目前分子生物学检测技术已日益用于法医、军事、人类医药以及科学研究等多项领域。如在人类健康方面，通过对检测者的血液、其他体液或细胞中的DNA提取，并进行核酸序列扩增，进而检测其目的序列或易感位点收集相关基因信息后，通过对已知信息的解读使人们了解自己的基因信息，预知身体患病的风险，从而改善自己的生活环境与习惯，避免或延缓疾病的发生。又如在法医鉴定领域，通过提取家属的DNA可对死者的身份进行辨认。

目前用于提取基因组DNA的体液通常来自于血液，但使用血液作为检测来源具有很多缺点。首先，血液中的DNA主要来自于白细胞，而血液中存在大量不含有DNA的红细胞，所以在提取纯度较高的DNA时需要去除红细胞的影响。其次血液的采集需要经过训练的专业人员操作。此外，血液采集作为一种侵入性方式，经常给供试者带来一定程度的不适与疼痛，再者，血液采集过程还需要避免一些血源性病原体与细菌造成的感染，并且采集好的血液必须要冷藏或尽快进行DNA提取。而与其相比，唾液作为一种人体较易获得的体液，采集更为方便。纯净的唾液并不含有人体DNA，但由于口腔上皮细胞处于不断的新陈代谢，每时每刻都存在细胞脱落，因此，通过唾液可以得到DNA。

相比于血液采集，唾液采集具有以下明显优势：1无刺痛，无伤害取样，避免了对供试者造成不必要的痛苦；2操作简便，采集人员不需要进行专业培训，可自行取样寄送；3适用广泛，一些人群不适合采血，例如老人与小孩等，另外一些人群则抗拒采血，如晕血和精神疾病患者；4廉价高效，节省了注射器与抗凝管等耗材的费用；5运输方便，若要进行大范围长距离的运输，唾液显然更适合在实验室与各个收集地之间传递。

用于基因检测的DNA首先应保证其纯度与完整性，如果DNA发生断裂降解等损伤，则势必会直接影响到后续实验，进而影响分析结果的准确性；而唾液中含有的有机物与细菌等也会对细胞DNA的完整性造成一定影响；另外唾液保存液作为唾液DNA的保存介质，也存在被氧化和微生物污染的风险。微生物会将DNA作为养料，甚至分泌出促进DNA加速降解的酶，破坏DNA的完整性，进而导致后续实验数据的可信度大大降低。因此，将唾液较好的保存起来，对于唾液作为基因组DNA的来源应用于基因检测中将具有至关重要左右。而就目前市场上的大部分唾液保存液都无法很好的保证唾液DNA的纯度与完整性，而市面上较好的唾液保存液又无法对唾液DNA进行长期保存。因此，研究开发一种保存效果好，保存方便，保存时间长的人体唾液样本保存液具有十分重要的意义。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明的目的是提供一种保存人体体液如唾液中的DNA组合物以及其制备方法。本发明涉及从人类体液，如唾液的样品中提取核酸的试剂组合物，所述试剂组合物包括变性剂、去污剂、金属离子螯合剂、还原剂、抑菌剂以及缓冲剂和蛋白酶，使得样品中的核酸在室温条件下稳定保存至少24个月，并可直接用于聚合酶链反应、基因检测等下游实验而无需其他处理。具体的，所述组合物中包含尿素、十二烷基硫酸钠、反式-1，2-环已二胺四乙酸(CDTA)、Tris-HCl、抗坏血酸钠、对羟基苯甲酸丙酯、重氮烷基咪唑脲、乙醇、蔗糖和蛋白酶K。更为具体的，为实现上述发明目的，本发明采取的技术方案包括：提供一种用于保存人类唾液中核酸完整性的试剂组合物，包括变性剂、去污

进一步的，包括Tris-HCl、尿素、SDS、CDTA、乙醇、NaAc、对羟基苯甲酸丙酯、重氮烷基咪唑脲、抗坏血酸钠、蔗糖和蛋白酶K。