[发明专利]一种橘青霉发酵液中还原糖的检测方法

说明书

本发明涉及检测技术领域，公开了一种微生物发酵液中还原糖的检测方法，包括最佳DNS溶液配方选择的方法、最适反应时间选择和最优紫外测定波长确定。本发明使用DNS还原显色的方法检测橘青霉发酵液中还原糖的含量，通过还原糖含量的变化，判断橘青霉生长状态和生长环境，实现发酵生产过程中的有效控制，该方法简单易操作。本发明使用3,5‑二硝基水杨酸显色代替传统的碘酸滴定，还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5‑二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3‑氨基‑5‑硝基水杨酸，在碱性溶液中此化合物呈橘红色，在一定的浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的还原糖的含量。本发明的检测方法可以定量检测橘青霉发酵液中还原糖含量，容易操作，准确性和稳定性高。

技术领域

本发明属于检验测定技术领域，具体而言涉及橘青霉发酵液中还原糖的检测方法。

背景技术

葡萄糖和麦芽糖都是还原性单糖，是目前发酵酶液中以及酶解生产中普遍存在物质。测定还原糖含量是糖定量的基本方法，如分析测定水果和蔬菜中的可溶性糖、各种食品和饮品中的总糖、乳制品中的乳糖与蔗糖等，均可通过测定还原糖进行定量。

3,5-二硝基水杨酸(DNS)法是测还原糖的经典方法，DNS与还原糖共热后生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸，在一定的范围内，还原糖的含量和反应液颜色成正比，可利用比色法测定。同时也可以间接测出多糖的含量，由于多糖的水解产物为还原糖，通过多糖水解前后所测还原糖与总糖含量的差值，即可换算多糖的含量。DNS法测多糖的方法操作简便、快速、准确性高、重现性好。

目前，测定还原糖的方法很多，斐林试剂滴定法、高锰酸钾滴定法、次亚典酸滴定法、葡萄糖氧化酶法、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶法以及3,5一二硝基水杨酸比色法，与这些方法相比DNS定糖法具有操作简便、快速、精确、测定成本低等优点，尤其适合于低浓度糖样的测定而被广泛采用。

DNS水杨酸比色法测定还原糖浓度的基本原理是：其测定原理是：在碱性条件下，DNS与还原糖共热后被还原生成棕红色的氨基化合物3-氨基-5-硝基水杨酸，在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比。

还原糖浓度(mg/ml)＝X*稀释倍数N

A为反应样品紫外光密度值在标准曲线上查的毫克数，mg；

B为空白样品紫外光密度值在标准曲线上查的毫克数，mg；

X为由(B-A)查得葡萄糖标准曲线还原糖的毫克数mg；

N为稀释倍数N＝稀释液体积V/25；

但是DNS水杨酸比色法测定微生物还原糖存在以下缺点：红棕色反应终点的观察因人而异，反应终点不明显，存在误差较大，同时微生物还原糖最佳紫外测定波长位置对结果影响也很大，致使检测结果准确性降低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种橘青霉发酵液中还原糖的检测方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

(1)取待测橘青霉发酵液与显色试剂DNS溶液混合，得到混合液，所述DNS溶液的配方如下：

配方1、将6.3g 3,5-二硝基水杨酸和262ml 2mol/L NaOH溶液，加到500ml含有192g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g苯酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中一周后使用；

配方2、精确称取1g 3,5-二硝基水杨酸溶于20mL 1mol/L氢氧化钠中，加入50mL蒸馏水，再加入30g酒石酸钾钠，待溶解后用蒸馏水稀释至100ml，静置一段时间后使用；

(2)在DNS溶液中加入与待测样品等体积的去离子水，作为空白对照；