[发明专利]一种毛细管电泳的在线富集方法

说明书

本发明涉及天然药物提取技术领域，针对目前碘化物在线富集可持续操作时间有限的问题，公开了一种毛细管电泳的在线富集方法。该方法包括样品的处理和利用在线固相萃取‑毛细管电泳程序进行富集。该方法首次采用离子液体作为洗脱溶剂应用在在线固相萃取毛细管电泳的富集的技术中，并且应用在天然产物提取富集领域。经过富集方法处理之后，仪器的灵敏度大大提高，每种样品的检测限均比传统方法大大降低。本发明采用的离子液体，以及固相萃取中所用的吸附剂，大大减少了有机溶剂的使用，显著降低了提取过程中的污染与危害，改善了提取效果与提取效率，并且该方法简单，应用范围广泛，易于使用，富集效果显著。

技术领域

本发明涉及天然药物提取技术领域，尤其涉及一种毛细管电泳的在线富集方法。

背景技术

为了提高毛细管电泳的灵敏性，一种通过在线固相萃取-毛细管电泳连用的方法被提出。在这种方法中，将由实验室自制的小段裸熔石英毛细管内含有固相萃取吸附剂的分析物浓缩器插入毛细管的入口部分，将分析的化合物加载到固相萃取的吸附剂上，然后进行分析物的洗脱和分离。为了最大限度地减少因使用筛板构建分析物浓缩器时造成的电渗流干扰、电流不稳定和迁移时间的不可再现性问题，这种构建装置已发展为不使用两块筛板来固定吸附剂材料，而是要求进行固相萃取吸附剂的粒径比两端的毛细管的直径大。这种改善后的分析方法克服了分析复杂样品基质时毛细管电泳的低灵敏度问题，此外，在高压条件下的大样品加载也有效地避免了分析物的损失。整个在线固相萃取过程实现了一个消耗少量试剂的集成自动化模型，目前，这种富集方法已用于分析酸性抗生素，生物碱和生物样品等，而几乎没有用这种方法分析含有特定官能团的化合物。此外，一些传统的有机溶剂通常用于洗脱加载在集中器上的分析物，然而，由于它具有高挥发性和低粘度，可持续操作时间有限，导致少量分析物被提取，因此方法灵敏度低，因此开发一种新的绿色高效洗脱溶剂是有意义的。

离子液体由离子组成，与传统有机溶剂相比，已被广泛宣传为“绿色溶剂”，离子液体具有导电性高，电化学窗口大的优点，对许多无机和有机物质具有良好的溶解性及化学稳定性，能够很好的避免挥发性有机化合物的环境污染问题，且可循环使用。这些优异的性能使得离子液体在化学合成，萃取方法和电化学反应等方面得到大量得应用。在分析化学中，一些萃取技术如微萃取，微波辅助萃取等有使用离子液体作为萃取溶剂，在分离技术方面，气相色谱，液相色谱和毛细管电泳中也有应用离子液体的报告。在在线固相萃取-毛细管电泳连用中的应用离子液体还尚未报道，这在提高毛细管电泳的灵敏度，增强富集效果等方面有很大的潜力。

有机碘是人体碘化物的重要形式。它对于甲状腺激素的合成和神经系统的发育是必不可少的。此外，它在维持人体甲状腺的正常功能，代谢平衡和细胞增殖和分化中也起着重要作用。碘化物浓度相对较低，物理化学性质极为相似，使得不同碘化物的分析有一定的难度。目前，瞬态等速电泳，电感耦合等离子体质谱分光光度法，原子吸收光谱被用于测定碘化物。这些分析方法存在有一些限制：原子吸收光谱和色谱分析方法需要昂贵的设备，而且样品的分析需要很长时间。碘化物富集方法，如，使用在线样品处理柱测定碘化物及表面活性剂涂覆的多壁碳纳米管作为毛细管电泳检测碘化物的假固定相等，这些富集技术相对复杂且多灵敏度低。使用在线固相萃取毛细管电泳的方法测量碘化物3,5-二碘-L-甲状腺素(T₂)，3,5-二碘-L-酪氨酸(MIT)和L-酪氨酸(DIT)(化学结构式见图1)富集技术尚未使用。

中国专利申请公开号为CN102121919A的专利，公开了一种灵敏检测多种样品中三聚氰胺的毛细管电泳在线富集方法。该方法通过两种在线富集技术(阳离子耗尽进样和胶束扫集)联用测定三聚氰胺，使三聚氰胺的富集灵敏度与普通的区带毛细管电泳相比提高了2600倍，检出限降低为1.8μg/kg。该方法采用低电渗流下的电动进样，对进入毛细管中的样品有选择性，受样品基质影响小，不需要如液相色谱等方法中复杂的样品预处理过程，适用于多种样品中三聚氰胺的检测；灵敏度高，比已有的液相色谱、荧光光谱法的检出限降低两到三个数量级，使用的空心毛细管柱价格便宜，分析成本低。然而，该方法可持续操作时间有限，浪费水资源。

发明内容