[发明专利]一种毛细管电泳的在线富集方法

权利要求书

1.一种毛细管电泳的在线富集方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）样品处理：将TBAH和水加入粉碎后的海带和海藻干燥品中，用氮气流纯化后，立即盖上盖子，混匀后超声提取，然后加入蒸馏水并调节pH为4.8或9.0，得到混合样品溶液，离心、过滤；

（2）在线固相萃取-毛细管电泳程序：（A）定期用甲醇和硼砂缓冲液对嵌入固相萃取装置的毛细管进行冲洗；（B）样品加载30~50min；（C）用注射缓冲液清洁毛细管；（D）用洗脱溶剂洗脱加载到浓缩器中的化合物，所述洗脱溶剂为浓度为5~15mM的[EPy] [BF₄]，洗脱时间为50~60s；（E）引入缓冲液推动洗脱塞；（F）分离；

所述在线富集方法需要先构建分析物集中器，构建方法为：将内径145~155μm，外径355~365μm的裸熔石英毛细管进行1.8~2.2mm的切割，然后，引入0.98~1.02mm裸熔石英毛细管至长1.48~1.52cm内径0.299~0.301mm的铁氟龙套管中；将内径48~52μm的7.48~7.52cm长的裸露的熔融石英毛细管推入铁氟龙管的另一端，直到连接到集中器的入口端，然后使用注射器将内径48~52μm 长7.48~7.52cm的裸熔石英毛细管的另一端与真空泵连接，之后将集中器未连接毛细管的一端放入装有平均粒径为58~62μm 的Oasis HLB吸附剂的小瓶中，将吸附剂装载入浓缩器中，然后，用内径48~52μm 长67.45~67.55cm的分离毛细管推动集中器直到浓缩器位于铁氟龙套管的中间位置，整个构建过程在显微镜下完成，最后，检测集中器装置的流动性能。

2.如权利要求1所述的一种毛细管电泳的在线富集方法，其特征在于：步骤（1）中，所述海带和海藻干燥品与TBAH和水的质量体积比为1g:1g:18~22mL :28~32mL，TBAH的浓度为8~12wt％。

3.如权利要求1所述的一种毛细管电泳的在线富集方法，其特征在于：步骤（1）中，所述粉碎后的海带和海藻干燥品的粒径为100~120目；氮气流纯化时间为4~6min，超声提取温度为38~42℃，超声提取时间为3.5~4.5h；加入蒸馏水直至溶液体积达到24~26mL，离心转速为10000~15000 rpm，离心时间为3~8min，过滤器孔径为0.15~0.45μm。

4.如权利要求1所述的一种毛细管电泳的在线富集方法，其特征在于：步骤（2）中，所述（A）中，定期为每一天和分离期间，冲洗压力为900~950 mbar，用甲醇冲洗2~4min后用4.5~5.5mM的硼砂缓冲液冲洗3~5min；（B）中，样品加载pH为4.8或9.0，压力为900~950mbar；（C）中，注射缓冲液的压力为900~950mbar，清洁时间为1~3min；（D）中，洗脱压力为48~52 mbar，洗脱时间为50~60s；（E）中，在48~52 mbar下引入缓冲液140~160s来推动洗脱塞；（F）中，分离压力为24.5~25.5KV。