[发明专利]抗肿瘤靶向融合蛋白、其偶联物及用途

说明书

本发明涉及抗肿瘤靶向融合蛋白、其偶联物及用途。该抗肿瘤靶向融合蛋白由从N端到C端按式I或式II构造的序列构成。式I：PsTag‑Linker‑CPP‑KLAC；式II：KLAC‑CPP‑Linker‑PsTag。该偶联物为抗肿瘤靶向融合蛋白经其偶联位点与抗肿瘤化合物偶联而成，偶联位点为KLAC中的半胱氨酸。该抗肿瘤靶向融合蛋白不仅有明显改善的药代动力学性质，还具有明显的肿瘤靶向性；该偶联物可实现以两种不同抗肿瘤机制对肿瘤细胞进行协同杀伤，并通过抑制ATP的产生降低肿瘤细胞对药物的外排作用，形成逆转耐药作用，以此显著提高药效；该偶联物还能降低或消除所偶联抗肿瘤化合物的心肌细胞毒性。

技术领域

本发明涉及抗肿瘤靶向融合蛋白、其偶联物及用途，属于长效靶向抗肿瘤药物研究领域。

背景技术

据申请人所知，药物治疗依然是现在癌症治疗中主要手段之一，但是常常由于耐药性的产生而导致治疗失败，因此除了进一步增强药效和降低毒性，抗肿瘤药物的耐药成为目前抗肿瘤领域最主要的研究问题之一。

肿瘤细胞产生耐药性的主要原因之一，是ABC转运体(即ATP依赖性的转运蛋白)的过度表达，因此通过直接减少细胞ATP的产生是逆转多重耐药的更为直接有效的方法。线粒体是真核细胞产生ATP的重要细胞器，通过直接破坏耐药肿瘤细胞的线粒体，可以有效阻碍细胞内ATP的产生。

近年来，治疗性多肽在抗微生物、抗肿瘤以及在生物医学材料中表现出了巨大的应用前景而备受关注；其中，KLA是一种被广泛研究的能够破坏线粒体的生物活性肽。KLA的作用机制是通过破坏线粒体外膜，导致合成ATP的功能紊乱，并能使细胞色素C外漏到细胞质中，进一步激活死亡信号蛋白促进细胞凋亡。虽然KLA可以有效的破坏肿瘤细胞线粒体并使其凋亡，但由于缺乏靶向性、以及极短的体内半衰期等问题，限制了其进一步的开发。

PEG修饰(PEGylation)已广泛应用于延长治疗性多肽的半衰期。PEG修饰改变了生物医学分子的理化性质，例如其构象、静电结合和疏水性，从而带来该药物在药代动力学行为上的改进。一般而言，PEG修饰能够改善药物溶解度，降低免疫原性。而且，PEG修饰不仅能够延长药物半衰期，还能通过EPR效应被动靶向至肿瘤组织，增加药物在肿瘤部位的分布。此外，PEG修饰位点需要小心确定，以避免干扰治疗性融合多肽的活性位点。再者，PEG是相关聚合物的非均匀混合物，其缀合至抗肿瘤多肽或蛋白会产生具有类似的分子大小和化学性质的许多不同化学物种。这会令纯化变得复杂，并增加PEG修饰产物的生产成本。更严重的问题是发现长期使用PEG后，PEG会在组织中蓄积，严重时可对肾脏造成损伤。因此，亟待研发能克服上述问题的新技术手段。

发明人所在课题组已于2015.10.15申请了中国发明专利申请(申请号为201510675827.7，申请公布号为CN105524147A)，利用建库筛选的方法得到成系列的重组聚多肽，可通过与生物活性蛋白质融合表达，成为一种PEG修饰的替代方法，聚多肽融合蛋白具有增强稳定性、延长半衰期、降低免疫原性、不改变生物活性等诸多优点。在此基础上，发明人课题组有了更进一步的研究成果。

发明内容

本发明的主要目的是：克服现有技术存在的问题，提出抗肿瘤靶向融合蛋白，能改善抗肿瘤药物的肿瘤靶向性和药代动力学性质；同时，还提出以该融合蛋白为基础的偶联物，具有抗肿瘤作用；还提出该融合蛋白及偶联物的用途。

本发明解决其技术问题的技术方案如下：

抗肿瘤靶向融合蛋白，其特征是，由从N端到C端按式I或式II构造的序列构成：

式I：PsTag-Linker-CPP-KLAC；

式II：KLAC-CPP-Linker-PsTag；