[发明专利]一种基因测序文库的构建方法在审
| 申请号： | 201811627007.0 | 申请日： | 2018-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN111378718A | 公开（公告）日： | 2020-07-07 |
| 发明（设计）人： | 樊隆;夏俊秋;刘家栋;蒋浩君;吴政宪 | 申请（专利权）人： | 江苏金斯瑞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京坤瑞律师事务所 11494 | 代理人： | 罗天乐 |
| 地址： | 212009 江苏省镇江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因 序文 构建 方法 | ||
1.一种构建基因测序文库的方法，所述方法包括：
(1)将磁性粒子与转座酶包埋复合物接触，使得磁性粒子与转座酶包埋复合物形成复合体；
其中，每个转座酶包埋复合物包含(a)转座酶及(b)第一接头序列和/或第二接头序列；所述第一接头序列包含第一测序接头序列和转座酶识别序列，所述第二接头序列包含第二测序接头序列和转座酶识别序列；
其中，复合体中的磁性粒子与转座酶之间通过镍离子(Ni2+)-组氨酸相互作用结合；
(2)将(1)中得到的复合体与靶DNA样品孵育，产生两端带有接头的DNA文库。
2.根据权利要求1所述的方法，其中该方法不包括对靶DNA样品中所含的靶DNA定量的步骤。
3.根据权利要求1或2所述的方法，所述磁性粒子为螯合二价镍离子(Ni2+)的磁珠，优选地，磁性粒子通过偶联匹配位的氮川三乙酸(NAT)螯合二价镍离子。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中，所述转座酶包埋复合物在与磁性粒子接触之前是未经纯化的。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，所述转座酶带有多聚组氨酸标签；优选地，所述转座酶为Tn5转座酶。
6.根据权利要求1所述的方法，所述方法还包括
(3)在孵育之后从(2)的反应体系分离复合体；和
(4)以复合体作为模板进行PCR扩增。
7.根据权利要求6所述的方法，所述PCR使用包含第一测序标签序列的前引物和包含第二测序标签序列的后引物。
8.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中，所述转座酶包埋复合物中所述转座酶与磁性粒子以60U:0.5mg至2100U:0.5mg的比例结合；优选地，所述比例为750U:0.5mg。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，所述复合体与靶DNA样品的孵育在15～50mM咪唑的存在下进行；优选15mM。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，所述复合体与靶DNA样品的孵育是在振荡速度为700-2000rpm和震荡时间为20-40min条件下进行；优选的震荡速度是1100rpm；优选的震荡时间是30min。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，所述靶DNA是质粒、基因组DNA、或DNA扩增产物。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，所述靶DNA来源于细胞、组织或微量DNA样品。
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