[发明专利]心肌损伤标志物MMPs、TIMPs及cTnI检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及一种医学检测技术领域，尤指一种心肌损伤标志物MMPs、TIMPs及cTnI检测试剂盒及检测方法，所述试剂盒主要组成：荧光标记探针、抗MMPs、TIMPs及cTnI单克隆抗体、抗鼠IgG抗体、固相膜、检测卡，本发明首先建立MMPs、TIMPs并结合cTnI的检测，用于心肌损伤的组合检测和诊断方案，优于传统心衰标志物配组，为临床判断心肌梗死和基质重构相关的心力衰竭提供更准确的科学依据，其次基于荧光胶乳免疫层析定量技术的免疫层析荧光定量检测方法，组合及分别检测MMPs、TIMPs及cTnI，心肌损伤检测体系，建立了免疫层析，荧光定量检测方法，突破传统的酶联免疫法（ELISA），率先在国内建立基于荧光胶乳免疫层析定量技术的心肌损伤检测体系，具有快速、准确、灵敏度高、特异性高的特点。

技术领域

本发明涉及一种医学检测技术领域，尤指一种心肌损伤标志物MMPs、TIMPs及cTnI检测试剂盒及检测方法。

背景技术

过去认为心脏重构只是由于心肌细胞内源性的变化，现在认识到心肌细胞外基质中胶原的数量、组成和结构的变化也参与了心脏重构，即基质组织修复再生的过程，并且是心室重构的重要原因，又称为心肌基质重构；心肌基质重构是决定心脏病患者心功能及其预后的主要因素之一，是心脏基质成分合成或降解代谢失平衡的结果，心脏基质在维持心脏结构和功能完整性方面起着重要的作用；基质组织修复再生引起心肌纤维化和进行性心室扩张，最终导致心力衰竭。

基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinase,MMPs）在心肌中存在的能降解所有心脏基质成分，是重构过程中心脏基质降解的主要因素；在衰竭的心脏中，MMPs活性升高导致纤维胶原降解、细胞外基质重构，导致左室进行性扩张、收缩功能逐渐下降，MMPs在转录前和转录后水平都可被调节，而且可以通过底物间的相互作用和通过内源性生理抑制剂即基质金属蛋白酶组织抑制剂（tissue inhibitor of metalloproteinase, TIMps）来调节；因此MMPs、TIMPs及其调节因子间的相互作用决定了心肌纤维化过程的进展，调节心肌MMPs、TIMPs的表达和活性，成为控制心衰进展中心脏基质的组织修复和再生的重要治疗手段。

经多项研究表明，MMPs、TIMPs在心肌损伤中，较以往所检测的标志物而言，具有更加敏感，更加准确地反映心肌损伤程度的特性；但是目前国内对心机损伤标志物以及MMPs、TIMPs的检测方法均步骤繁多，检测速度慢，硬件要求高，且价格成本非常昂贵，大多限于在中心实验室使用，不能满足临床快速诊断、准确诊断的要求和大管理的需求，同时在基层医院、现场急救大规模推广应用方面也受到严重制约；因此研究相关简便低耗的新型检测方式及开发新型、低成本、简便易用的检测产品成为快速诊断的重要战略问题。

发明内容

为解决上述问题，本发明旨在公开一种医学检测技术领域，尤指一种心肌损伤标志物MMPs、TIMPs及cTnI检测试剂盒及检测方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种心肌损伤标志物MMPs、TIMPs及cTnI试剂盒，其特征在于，所述试剂盒主要组成：荧光标记探针、抗MMPs、TIMPs及cTnI单克隆抗体、抗鼠IgG抗体、固相膜、检测卡。

优选地，所述荧光标记探针为纳米级高保真荧光标记探针；其制备方法为：利用胶乳表面的羧基与蛋白质的胺基连接，将蛋白质连接到胶乳颗粒的表面以制备荧光标记探针。

优选地，所述抗MMPs、TIMPs及cTnI单克隆抗体为荧光胶乳微粒标记抗MMPs、TIMPs及cTnI单克隆抗体，其制备方法包括：

1）将荧光胶乳微球溶解于磷酸缓冲液中；

2）加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺和碳化二亚胺，进行超声清洗，时间为30S；

3）放置于室温避光孵育30min以进行活化；