[发明专利]心肌损伤标志物MMPs、TIMPs及cTnI检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种心肌损伤标志物MMPs、TIMPs及cTnI试剂盒，其特征在于，所述试剂盒主要组成：

荧光标记探针、抗MMPs、TIMPs及cTnI单克隆抗体、抗鼠IgG抗体、固相膜、检测卡。

2.根据权利要求1所述的一种心肌损伤标志物MMPs、TIMPs及cTnI试剂盒，其特征在于，所述荧光标记探针为纳米级高保真荧光标记探针；其制备方法为：利用胶乳表面的羧基与蛋白质的胺基连接，将蛋白质连接到胶乳颗粒的表面以制备荧光标记探针。

3.根据权利要求1所述的一种心肌损伤标志物MMPs、TIMPs及cTnI试剂盒，其特征在于，所述抗MMPs、TIMPs及cTnI单克隆抗体为荧光胶乳微粒标记抗MMPs、TIMPs及cTnI单克隆抗体，其制备方法包括：

1）将荧光胶乳微球溶解于磷酸缓冲液中；

2）加入N-羟基硫代琥珀酰亚胺和碳化二亚胺，进行超声清洗，时间为30s；

3）放置于室温避光孵育30min以进行活化；

4）对其离心后沉淀用柠檬酸缓冲液溶解；

5）活化后的荧光胶乳以0.5mg/ml的比例将抗 MMPs、TIMPs及cTnI单克隆抗体加入至荧光胶乳中；

6）混合均匀后于室温搅拌反应，时间为2h；

7）采用磷酸缓冲液离心洗涤，重复3次操作；

8）沉淀后采用磷酸缓冲液溶解，并置于4℃的条件下储存备用。

4.根据权利要求1所述的一种心肌损伤标志物MMPs、TIMPs及cTnI试剂盒，其特征在于，所述的固相膜为硝酸纤维素膜。

5.根据权利要求1所述的一种心肌损伤标志物MMPs、TIMPs及cTnI试剂盒，其特征在于，所述检测卡的制备方法包括：首先采用包被缓冲液分别将抗MMPs、TIMPs及cTnI单克隆抗体和抗鼠IgG抗体稀释至1.0mg／ml，然后喷洒至硝酸纤维素膜上相对应的检测区和质控区，在室温处晾干以完成包被，最后在底衬上依次黏接贴样品垫、包被膜及吸水纸，组装成试剂检测卡，置于4-30℃条件下储存备用。

6.根据权利要求5所述的一种心肌损伤标志物MMPs、TIMPs及cTnI试剂盒，其特征在于，所述的包被缓冲液的制备方法包括：将荧光胶乳微粒标记抗 MMPs、TIMPs及cTnI单克隆抗体以 1：50～1000比例稀释到磷酸缓冲液中，并将其加入至结合垫中。

7.一种心肌损伤标志物MMPs、TIMPs及cTnI检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述的检测方法主要包括：

S1、建立标准曲：

对MMPs、TIMPs及cTnI质控品稀释为不同浓度，分别对每一种浓度重复测定若干次取均值，以质控品浓度为横坐标 ，荧光信号强度测试值为纵坐标，建立拟合标准曲线；

S2、精密度与准确度测试：

抽取两个批次的MMPs、TIMPs及cTnI检测试剂，分别对MMPs、TIMPs及cTnI质控品中浓度为0.5、10.0、65.0ug／L的质控品进行测定，每个浓度重复20次，计算批内和批间各浓度测试结果的精密度，并统计各浓度测试结果偏倚情况；

S3、干扰试验：

用试剂盒分别检测含有2.0g／L胆红素、30.0g／L三酰甘油、15.0g／L胆固醇的MMPs、TIMPs及cTnI质控品，质控品浓度分别为5.0ug／L和50.0ug／L；若测试结果相对偏差在±20％以内时，干扰物不影响标本测试；

S4、稳定性测试：

将成品试剂置于阴凉库密封保存，于14个月内，期间每个月分别测试浓度为0.5、1.0、22.0、65.0ug／L的MMPs、TIMPs及cTnI质控品，每个浓度重复5次，检测结果用均值±SD表示，若测试结果相对偏差在±20％以内，则判定试剂稳定性良好。