[发明专利]vMIP-Ⅱ诱导CD8+ T细胞去磷酸化为Tcm及其在药物中的应用

说明书

本发明公开了病毒巨噬细胞炎性蛋白vMIP‑Ⅱ诱导CD8⁺T细胞去磷酸化为Tcm的应用。发明中诱导CD8⁺T去磷酸化为Tcm的vMIP‑Ⅱ是本实验室研制并通过国家药品和生物制品检定。本发明通过恒河猴SIV感染模型研究CD8⁺T细胞，发现vMIP‑Ⅱ可使Tcm依赖vMIP‑Ⅱ剂量增殖，且该增殖细胞的差异基因主要富集于趋化因子受体和磷酸化通路，进一步发现该增殖是vMIP‑Ⅱ封闭CD8⁺T趋化因子受体而低表达G蛋白，降低胞内Ca²⁺浓度和线粒体膜电位、抑制磷酸化的相关基因，使磷酸化蛋白ERK1/2和Akt低表达，从而使CD8⁺T磷酸化信号减弱，发生代谢重编程而转化为Tcm。因此，vMIP‑Ⅱ作用机制的这一发现为HIV/SIV感染艾滋病的药物研发提供全新策略，为抗病毒与抗肿瘤的过继性免疫治疗提供新的手段，具有重要的临床应用价值。

技术领域

本发明属病毒病毒巨噬细胞炎性蛋白vMIP-Ⅱ在防治炎症和SIV/HIV感染等方面进行的基础研究领域，更具体地说，本发明涉及病毒巨噬细胞炎性蛋白vMIP诱导CD8⁺ T细胞去磷酸化为长寿命中枢记忆细胞(CD8⁺ Tcm)的作用机制。

背景技术

在血液中循环并存在于淋巴器官中的记忆性CD8⁺ T细胞是长寿命T细胞免疫的重要组成部分。这是由于CD8⁺ T细胞主要通过其表面的T细胞受体(TCR)识别由MHCⅠ分子递呈的抗原肽而被活化，活化后的CD8⁺ T细胞会在收缩阶段凋亡90%~95%，仅小部分形成具有抗原特异性的记忆CD8⁺ T细胞。这些记忆CD8⁺ T细胞在再次暴露于病原体时仍能迅速发挥效应作用清除抗原，但也有许多与初始细胞相同的特性，包括多能性和迁移到淋巴结和脾脏的能力。因此，记忆细胞体现了初始细胞和效应细胞两者共有的特征，由此而引发了一场围绕记忆T细胞是从效应细胞发展还是直接从初始细胞发展的长期争论。

记忆T细胞通过表达或不表达趋化因子受体CCR7和血管L-选择素 CD62(CD62L)来实现在机体外周血和淋巴组织间的循环，分为中央记忆性T细胞(Central memory Tcells，Tcm)和效应记忆性 T细胞(Effector memory T cells，Tem)。一般情况下Tcm细胞表达CCR7和CD62L，主要分布于外周组织免疫器官和淋巴结，当再次受抗原刺激时可迅速分裂增殖和分化；Tem细胞低水平表达或不表达CCR7和CD62L，主要存在于非淋巴组织和器官，参与周身循环，可迁移至外周炎症组织发生速发性效应功能。组织定居记忆性T细胞(Tissue-resident memory T cells，Trm)则不表达CCR7和CD62L，高表达CD69和/或CD103且不参与体循环。

病毒巨噬细胞炎症蛋白-Ⅱ(vMIP-Ⅱ)是由卡波氏肉瘤疱疹病毒(KSHV) K4基因编码的一种人趋化因子小分子蛋白，与人CC类趋化因子巨噬细胞炎性蛋白Ⅰ在氨基酸序列上有较高的同源性。vMIP-Ⅱ可以利用与其他趋化因子相似的结构骨架与其受体进行相互结合作用，已有研究证明，vMIP-Ⅱ是广谱的趋化因子受体抑制剂，具有结合多种人趋化因子受体亚族的能力，并能竞争性抑制HIV与靶细胞上共受体CCR5、CXCR4、CCR3等的结合，以阻止病毒进入靶细胞，具有抗HIV感染的作用。趋化因子受体其胞内区的羧基末端含丝氨酸/苏氨酸，可发生磷酸化，从而与G蛋白相偶联，参与MAPK、JAK-STAT、NF-κB等信号转导通路的调控。在哺乳动物中，NF-κB与抑制性蛋白IκB紧密结合，以无活性状态存在于细胞质当中。在炎性信号的刺激下(如TNF-α、LPS、IL-1等)，IKK可被激活。接着IKK催化IκB发生磷酸化，进而IκB可被泛素标记，从而被转运到蛋白酶体发生降解，释放出游离的NF-κB。之后，游离的NF-κB便可通过核孔复合物在核转位序列的介导下转位入核，对多种炎症与免疫相关基因(包括IL-1β和TNF-α等)的转录发挥调控作用。