[发明专利]一种间皮素CAR-T细胞免疫组化染色试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种间皮素CAR‑T细胞免疫组化染色的试剂盒，其中，所述试剂盒包括第一抗体和第二抗体，所述第一抗体为浓度0.8‑1.0mg/ml的含可检测标记的间皮素结构域III融合蛋白，所述第二抗体为浓度0.8‑1.2mg/ml的抗第一抗体的抗体；其中，所述第一抗体的工作浓度为所述第一抗体的1:50稀释液，所述第二抗体的工作浓度为所述第二抗体的1:200～1:600稀释液。本发明还公开了所述试剂盒在间皮素CAR‑T细胞非诊断目的的检测中，以及在制备防治疾病的药物中的应用。所述试剂盒具有优良的检测特异性和灵敏度，便于应用和推广。

技术领域

本发明属于免疫组织化学技术领域，具体涉及一种间皮素CAR-T细胞免疫组化染色试剂盒及其应用。

背景技术

间皮素(Mesothelin，简称meso或MSLN)是一种分子量为40kDa的细胞表面糖蛋白，其高表达于多种肿瘤组织中，也可表达于正常胸膜、心包和腹膜的间皮细胞中。虽然间皮素不是肿瘤特异性蛋白，但测定癌症患者血液或组织中的间皮素可能有助于这些患者的诊断。2017年10月19日，美国政府批准第二种基于改造患者自身免疫细胞的疗法(yescarta疗法)治疗特定淋巴癌患者，yescarta疗法属于嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(ChimericAntigen Receptor T-Cell Immunotherapy，简称CAR-T)。近年来，关于CAR-T的研究方兴未艾。

间皮素CAR-T细胞治疗是靶向间皮素抗原阳性表达的肿瘤细胞的一种新型CAR-T细胞疗法，逐渐成为治疗实体瘤的一种有效治疗方法，但是间皮素CAR-T细胞治疗后，肿瘤组织中间皮素CAR-T细胞的存在和浸润量仍缺乏可行的检测方法。肿瘤组织间皮素CAR-T细胞的阳性表达是间皮素CAR-T细胞通过血液循环迁移到肿瘤局部杀伤肿瘤细胞的直接证据，间皮素CAR-T细胞比例还与患者治疗疗效及预后密切相关。采用抗原与抗体特异性结合的原理，免疫组化技术为CAR-T细胞在肿瘤组织的阳性表达率检测提供了可行的检测方法。

现有技术检测间皮素CAR-T细胞在肿瘤局部的表达，主要是通过全长间皮素抗原作为一抗，特异性相对较差，存在假阴性或者假阳性结果；而且灵敏度不高。

发明内容

本发明解决的技术问题是为了克服临床中间皮素CAR-T细胞检测技术特异性较差的缺陷，提供了一种间皮素CAR-T细胞免疫组化染色试剂盒及其应用。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案之一为：一种间皮素CAR-T细胞免疫组化染色试剂盒，其中，所述试剂盒包括第一抗体和第二抗体，所述第一抗体为浓度0.8-1.0mg/ml的含可检测标记的间皮素结构域III融合蛋白，所述第二抗体为浓度0.8-1.2mg/ml的抗第一抗体的抗体；所述第一抗体的工作浓度为所述第一抗体的1:50稀释液；所述第二抗体的工作浓度为所述第二抗体的1:200～1:600稀释液。该试剂盒染色过程简便快捷，提高了检测的特异性和灵敏度，可以在间皮素CAR-T细胞治疗后的肿瘤组织标本中检测间皮素CAR-T细胞的阳性率，从而指导药物的进一步制备和用药策略。使用本发明中的稀释液、稀释比例稀释得到的所述第一抗体和所述第二抗体，也可以直接用于本发明的试剂盒中。即试剂盒中可以包括直接应用、无需稀释的160～200μg/ml的第一抗体(即0.8-1.0mg/ml的第一抗体稀释50倍而得)，和1～6μg/ml例如1、1.33、1.5、2、2.5、3、4、4.5、5、6μg/ml等浓度的第二抗体(即0.8-1.2mg/ml的第二抗体稀释200～600倍而得)。

在一个较佳的具体实施例中，所述试剂盒中，所述含可检测标记的间皮素结构域III融合蛋白包括如SEQ ID NO:7所示的人间皮素结构域III蛋白(即Meso3)；其中，所述第一抗体的浓度为0.9mg/ml，所述第二抗体的浓度为1.0mg/ml，所述第二抗体的工作浓度为所述第二抗体的1:400稀释液。同上所述，试剂盒中可以包括直接应用、无需稀释的180μg/ml的第一抗体(即0.9mg/ml的第一抗体稀释50倍而得)和2.5μg/ml的第二抗体(即1.0mg/ml的第二抗体稀释400倍而得)。