[发明专利]一种间皮素CAR-T细胞免疫组化染色试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种间皮素CAR-T细胞免疫组化染色的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括第一抗体和第二抗体，所述第一抗体为浓度0.8-1.0mg/ml的含可检测标记的间皮素结构域III融合蛋白，所述第二抗体为浓度0.8-1.2mg/ml的抗第一抗体的抗体；其中，所述第一抗体的工作浓度为所述第一抗体的1:50稀释液，所述第二抗体的工作浓度为所述第二抗体的1:200～1:600稀释液。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述含可检测标记的间皮素结构域III融合蛋白包括如SEQ ID NO:7所示的人间皮素结构域III蛋白；和/或，所述第一抗体的浓度为0.9mg/ml，所述第二抗体的浓度为1.0mg/ml，所述第二抗体的工作浓度为所述第二抗体的1:400稀释液。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述含可检测标记的间皮素结构域III融合蛋白还包括轻链信号肽和Fc；优选地，所述轻链信号肽的序列如SEQ ID NO:6所示，所述Fc为IgG4 Fc；更优选地，所述轻链信号肽位于所述人间皮素结构域III蛋白的N端，所述Fc位于所述人间皮素结构域III蛋白的C端；最优选地，所述间皮素结构域III融合蛋白的序列如SEQ ID NO:2所示。

4.如权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述可检测标记包括以下标记的一种或多种：酶标记包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、过氧化物酶-抗过氧化物酶和碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶，荧光素标记包括异硫氰酸荧光素、异硫氰酸罗丹明，生物素标记和同位素标记。

5.如权利要求1-4任一项所述的试剂盒，其特征在于，还包括与可检测的标记相配合的试剂；优选地，所述与可检测的标记相配合的试剂包括HRP酶、DAB显色液、苏木素和中性树胶中的一种或多种。

6.如权利要求1-5任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述第二抗体为HRP酶标记的抗生物素的抗体。

7.一种间皮素CAR-T细胞的非诊断目的的检测方法，其特征在于，用如权利要求1-6任一项所述的试剂盒来检测细胞，以确定所述细胞是否为肿瘤组织浸润间皮素CAR-T细胞。

8.如权利要求7所述的检测方法，其包括以下步骤：

(1)加入所述工作浓度的所述第一抗体于经处理的离体组织切片上，孵育后冲洗；

(2)随后加入所述工作浓度的所述第二抗体，孵育后冲洗；

(3)显色、复染、脱水及封片后分析染色结果。

9.如权利要求7或8所述的检测方法，其中所述稀释液为PBS缓冲液，所述步骤(1)的孵育条件为4℃过夜，所述冲洗为PBS缓冲液冲洗3次，每次3分钟；所述步骤(2)的孵育条件为37℃30分钟，所述冲洗为PBS缓冲液冲洗3次，每次3分钟；和/或，所述步骤(3)的显色使用DAB，复染使用苏木素，脱水使用乙醇，封片使用中性树胶。

10.如权利要求1-6任一项所述的试剂盒在筛选或制备防治疾病的药物中的应用；优选地，所述疾病为CAR-T疗法治疗后的癌症；更优选地，所述癌症为间皮素异常表达的癌症，如淋巴癌。