[发明专利]烤鲅鱼过程中形成的荧光碳点的安全性评价方法

说明书

本发明公开了一种烤鲅鱼过程中形成的荧光碳点的安全性评价方法，包括以下步骤，A、表征荧光碳点的特征理化性质：具体为荧光碳点的荧光性质及其粒径；B、荧光碳点影响消化酶的酶活：具体为荧光碳点影响胃蛋白酶和胰蛋白酶的酶活力；C、荧光碳点的生物吸收率及分布：具体为荧光碳点透过小鼠小肠的能力和荧光碳点在小鼠脏器中的分布（肠道、肝、脑、心、肺和肾）D、荧光碳点的细胞毒性：具体为荧光碳点对NRK细胞的毒性和凋亡，在细胞中的分布。本发明荧光碳点来源于食物，在检验荧光碳点的特征理化性质的基础上，进一步通过细胞试验与初步动物试验对烤鲅鱼肉中荧光碳点进行安全性判断。

技术领域

本发明涉及一种烤鲅鱼过程中形成的荧光碳点的安全性评价方法。

背景技术

食品在加工过程中，原料中的有机分子和低聚物受热发生一系列反应，这与化学合成中通过水热/溶剂热法合成荧光碳点的过程类似，鲅鱼是一种富含蛋白质的海洋鱼类，主要分布在中国黄渤海，资源丰富，是中国黄渤海沿岸经济鱼类之一，烤制因其独特的香味广受欢迎，是有着千年历史的很普遍的加工方法，鲅鱼肉在烤制过程中，鲅鱼鱼肉中的大量蛋白质，少量糖等生物元素被降解为短肽链、氨基酸和寡糖等，这些物质之间相互发生反应，形成了烤鲅鱼肉中的荧光碳点，这种荧光碳点是由分散的类球状碳颗粒组成，尺寸极小（10 nm以下），其含有的主要元素为碳（C）、氢（H）、氧（O）、氮（N），主要化学结构有羟基（-OH），羧基（-COOH），羰基（-C=O）和氨基（-NH2）等，它还具有良好的水溶性且其水溶液在365nm紫外光照射下能发出明亮的蓝色荧光，故称之为荧光碳点，食品安全问题一直是人们关注的焦点，烤鱼作为日常生活中常吃的食物，对其安全性的研究十分重要，目前，人们对含有新型荧光碳点的食品的看法通常是负面的，然而在世界上任何一个地方，都还没有关于食品中荧光碳点的强制性标签，消费者很难了解荧光碳点的相关信息，也不确定在商业化的产品中是否存在荧光碳点，因此，对烤鱼中荧光碳点的体内分布情况以及生物安全性研究十分重要，目前，报导的对于纳米材料的安全性的评价方法包括构建细胞模型与动物模型，观察纳米材料对细胞的毒性和生物分布，寻找纳米材料对生物体潜在影响的原因，全面解析纳米材料从细胞到生物水平的生物安全性。

发明内容

本发明的目的是提供一种烤鲅鱼过程中形成的荧光碳点的安全性评价方法。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：一种烤鲅鱼过程中形成的荧光碳点的安全性评价方法，包括以下步骤：

A、将荧光碳点溶在超纯水中，使用荧光光谱仪扫描荧光碳点的3D荧光波谱，以确定荧光碳点的最大激发和发射波长，同时得到碳点的荧光峰型，使用透射电子显微镜观察荧光碳点的粒径分布；

B、胃蛋白酶酶活的测定是以血红蛋白为底物，以酪氨酸作对照，确定胃蛋白酶的活力单位，胰蛋白酶酶活的测定是以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯为底物，以不加荧光碳点为空白，确定胰蛋白酶的活力单位；

C、将NRK细胞接种在细胞培养基中培养，待NRK细胞生长至对数期时进行消化，消化后的NRK细胞悬液进行贴壁培养24 h，得到贴壁生长的NRK细胞；

D、将烤鲅鱼肉中荧光碳点分散在细胞培养基中，漩涡震荡，得到荧光碳点溶液；

E、将步骤D中的荧光碳点溶液梯度稀释成若干浓度，分别加入到步骤C得到的贴壁生长的NRK细胞中，培养24 h；

F、将培养后的NRK细胞在四氮唑蓝溶液中继续培养，向四氮唑蓝溶液培养后的NRK细胞中加入二甲基亚砜，在波长下测定吸光值，作为实验组结果，设置对照组，对照组的结果为将NRK细胞依次经细胞培养基、四氮唑蓝溶液和二甲基亚砜溶液处理后测得的吸光度值，将实验组结果和实验对照组结果代入公式计算得到细胞存活率；