[发明专利]一种猪伪狂犬病重组病毒株及其构建方法

说明书

本发明属于猪伪狂犬病病毒技术领域，具体公开一种猪伪狂犬病重组病毒株及其构建方法。所述重组病毒株为rPRV‑gE^‑/TK^‑/GP5⁺/M⁺、rPRV‑gE^‑/TK^‑/GP5⁺/M⁺/IL‑18⁺、rPRV‑gE^‑/TK^‑/GP5m⁺、rPRV‑gE^‑/TK^‑/GP5m⁺/IL‑18⁺或rPRV‑gE^‑/TK^‑/IL‑18⁺，其中GP5m是指修饰型GP5。本发明重组病毒株对小白鼠安全有效，可诱导机体产生有效的抗PRV、PRRSV特异性中和抗体、抗PRRSV特异性ELISA抗体。

技术领域

本发明属于猪伪狂犬病病毒技术领域，具体涉及一种猪伪狂犬病重组病毒株及其构建方法。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV）引起的怀孕母猪在妊娠后期出现流产、早产或死产的繁殖障碍和新生仔猪的呼吸系统症状。自1987在美国发现以来，PRRSV已有快30年的历史。在中国自从1996年郭宝清首次分离到PRRSV以来，已有20年历史，世界上已陆续有不少国家出现了PRRSV，每年都给养殖业造成巨大的经济损失。感染PRRSV猪体液免疫产生的抗体主要是针对PRRSV结构蛋白的抗体，如：N蛋白、M蛋白和GP5蛋白。研究表明，猪接种PRRSV后7天就可检出N蛋白的特异性抗体，9～35天后可检出针对M蛋白的抗体。目前证明N蛋白抗体对病毒没有中和作用。PRRSV的主要中和性表位存在于GP5蛋白上，感染后7天即可检出GP5抗体，但针对GP5的非中和性抗体的出现早于其中和性抗体。这主要是由于位于GP5蛋白中和表位B之前非中和表位A对中和表位产生覆盖效应，导致中和表位B不能充分暴露，从而不能有效诱发较高的中和抗体。目前已有研究证实通过在ORF5基因的96位和97位核苷酸之间引入PADRE表位的修饰型ORF5m基因可以诱导机体产生更为高的中和抗体水平，这主要是去除了非中和表位A对中和表位B的覆盖性效应。

2012年初以来，许多使用猪伪狂犬病（PR）基因缺失活疫苗免疫的规模化猪场均出现了PR的流行，说明传统毒株的PR基因缺失疫苗已不能有效地预防PR的发生，因此，针对目前主要流行毒株的PR新型基因工程疫苗的研究显得尤为重要。目前在生产养殖上常使用PR常规疫苗来预防本病发生，但常规疫苗在免疫时常出现毒力返强、散毒、免疫效率较低、过敏反应、用量较大等弊端。近年来，随着分子生物学技术的发展，关于PRV的分子生物学研究取得了很大进展，若将外源基因插入到PRV基因组中构建出重组病毒，不仅保持了原病毒良好的抗原性，且其毒力不返强，易与野毒区别而且利用PRV作为载体同目的基因一起在动物体内表达，既安全又可达到一针多防的效果，对多种动物疫病的防控具有重大意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猪伪狂犬病重组病毒株及其构建方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：