[发明专利]一种人凝血酶原复合物中间产品液态保存的方法

说明书

本发明涉及一种人凝血酶原复合物中间产品液态保存的方法，步骤为：（1）血浆吸附，使用已平衡的凝胶搅拌吸附已去除冷沉淀的血浆；（2）凝胶洗涤，洗涤凝胶，去除非人凝血酶原复合物中蛋白成分；（3）凝胶洗脱，收集洗脱液，将步骤（2）洗涤结束的凝胶使用洗脱液进行洗脱，收集洗脱液；（4）洗脱液的超滤；（5）中间产品的保存，将浓缩液在中间产品非冻结状态下进行密封、保存；（6）检测。在本发明条件下保存人凝血酶原复合物中间产品，使中间产品能较好的保持活性；有利于生产过程的控制，降低制品在固液不同状态转换下不稳定和污染的风险；不需冻存和复融过程，有利于提高生产效率。

技术领域

本发明属于生物制药血液制品生产领域，具体涉及人凝血酶原复合物中间产品液态保存的方法。

背景技术

人凝血因子Ⅸ（Factor IX，FIX）是一种由肝脏合成的维生素K依赖性血浆蛋白，分子量约57KD，血浆含量1～7mg/L，是内源性凝血途径中的重要因子。FIX与其他维生素K依赖的凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅹ理化性质相似，与以上三种因子共同组成人凝血酶原复合物（Prothrombin Complex Concetrate，PCC）。

目前，PCC的主要生产工艺为两步凝胶吸附：以去除冷沉淀的血浆或Cohn组分Ⅲ为原料，经DEAE Sephadex A-50吸附后，收集洗脱液；再次经使用DEAE Sephadex A-50或其他凝胶，例如，DEAE Sephrose Fast Flow等，吸附，收集洗脱液，并经病毒灭活、冷冻干燥等步骤处理，获得最终产品。PCC的生产工艺较复杂，生产周期相对较长，经常会在第一次凝胶吸附后将中间产品进行冷冻保存，进行下一步操作时再将冻存的制品进行复融。但是由于凝血因子极易被激活、不稳定的特性，中间产品组分冻存后再次复融会引起凝血因子活性丧失，同时保存期间存在中间品微生物污染的风险，也给操作带来不便。

发明内容

本发明提供了一种人凝血酶原复合物中间产品液态保存的方法，目的是解决以人凝血因子Ⅸ（FIX）为主要成分的血液制品中间产品的制备及保存的问题，能使上述中间产品在液态状态下保持FIX活性的稳定。

本发明的技术方案为，将以FIX为主要成分的中间产品的缓冲液调整至氯化钠浓度≥0.3mol/L，在保存容器内密封，液态保存，温度范围可以根据氯化钠浓度的不同进行调整，以不冻结为准。

一种人凝血酶原复合物中间产品液态保存的方法，具体步骤为：

（1）血浆吸附

使用已平衡的DEAE Sephadex A-50（二乙基氨基乙基-葡聚糖 A-50）凝胶搅拌吸附已去除冷沉淀的血浆；

（2）凝胶洗涤

使用洗涤液洗涤上一步收集的凝胶，去除非人凝血酶原复合物（PCC）蛋白成分，洗涤液排空，不收集；

（3）凝胶洗脱，收集洗脱液

将步骤（2）洗涤结束的凝胶使用洗脱液进行洗脱，收集洗脱液于已清洁的超滤罐中；

（4）洗脱液的超滤

将步骤（3）获得的洗脱液浓缩至适合保存的体积，获得浓缩液；当中间产品的缓冲液中氯化钠浓度≥0.3mol/L时，不超滤。

（5）中间产品的保存

将浓缩液在中间产品非冻结状态下进行密封、保存；

（6）检测：FIX活性检测，根据《中国药典》2015年版三部人凝血因子Ⅸ效价测定法检测Ⅸ活性。