[发明专利]一种高度浓缩植物乳杆菌增殖剂及其制备方法和使用方法

说明书

本发明公开了一种高度浓缩植物乳杆菌增殖剂及其制备方法和使用方法，制备方法包括以下步骤：扩培：将类芽孢杆菌CGMCC No.8333种子液接种于脱脂乳培养基，摇床培养，获得纯培养物；离心：将纯培养物离心处理，取上清液；过柱：将上清液进行固相萃取过柱，流动相为20％～60％的甲醇溶液，收集流出液；蒸发：将收集的流出液进行蒸发，析出的物质即为高度浓缩植物乳杆菌增殖剂。本发明提供的浓缩增殖剂制备方法简单，设备要求低，成本低廉；本发明制备的浓缩增殖剂对植物乳杆菌ST‑III在乳中的生长具有显著促进作用，极大的提高了ST‑III在实际产品开发中的应用潜力。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种高度浓缩植物乳杆菌增殖剂及其制备方法和使用方法。

背景技术

植物乳杆菌ST-III对人体有着巨大的益生作用，如调节血脂、降低胆固醇、粘附肠道上皮细胞等功能，植物乳杆菌ST-III的全基因组于2010年测定，并在实际生产中得到广泛应用。然而，将植物乳杆菌ST-III添加到牛乳中培养，生物量很低，几乎没有生长，原因可能是无法利用牛乳自主合成某些必须营养物质。前期研究发现类芽孢杆菌CGMCC No.8333发酵制备的上清液对植物乳杆菌ST-III在乳中的生长具有显著促进作用，但存在发酵时间过长的问题，发酵16 h，牛乳pH从6.6降至5.3。常规的类芽孢杆菌CGMCC No.8333上清液浓缩方法，如加热或离心，对本专利得增殖剂效果都不理想，促进效果不明显，因为增殖剂中含有大量乳糖，加热或离心无法将乳糖有效结晶或分离出来，无法实现有效浓缩。因此通过一定手段提高增殖剂浓度以便能够大幅缩减ST-III的发酵时间具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种高度浓缩植物乳杆菌增殖剂及其制备方法和使用方法，以及该增值剂对植物乳杆菌ST-III的使用方法，该增值剂及使用方法对植物乳杆菌ST-III在乳中的生长具有显著的促进作用。

本发明为达到上述目的，具体通过以下技术方案得以实现的：

一种高度浓缩植物乳杆菌增殖剂的制备方法，包括以下步骤：

（1）扩培：将类芽孢杆菌CGMCC No.8333种子液以体积百分比为3%的比例接种于10%脱脂乳培养基，在温度为25~30℃，摇床转速为150~200 rpm的条件下培养96~144 h，获得纯培养物；

（2）离心：将步骤（1）所得纯培养物于4~15℃，以转速5000~10000 rpm离心，离心时间5~10 min，取上清液；

（3）过柱：将步骤（2）所得的上清液进行固相萃取过柱，流动相为20%~60%的甲醇溶液，收集流出液；

（4）蒸发：将步骤（3）所收集的流出液进行蒸发，析出的物质即为高度浓缩植物乳杆菌增殖剂。

作为上述制备方法的进一步优化，步骤（1）中培养的时间为120~144h。

作为上述制备方法的进一步优化，步骤（2）中离心的转速为6000~9000 rpm。

作为上述制备方法的进一步优化，步骤（3）中甲醇溶液的浓度为20~40%。

作为上述制备方法的进一步优化，步骤（4）中的蒸发为旋转蒸发或平行蒸发，蒸发加热温度为40~60℃，蒸发时间为1.5~3h。

本发明的一种利用上述任一的制备方法制得的高度浓缩植物乳杆菌增殖剂。

本发明的一种上述高度浓缩植物乳杆菌增殖剂的使用方法，包括以下步骤：

（1）将所述高度浓缩植物乳杆菌增殖剂溶于水中，浓度为1%，获得增殖剂溶液；

（2）将步骤（1）所得的增殖剂溶液以1:4的比例加入至原料乳中，混合均匀，在温度118~121℃条件下灭菌处理15~20min，冷却至室温，获得培养乳；