[发明专利]一种利用饱和脂肪酸为底物生产长链二元酸的方法

权利要求书

1.一种利用饱和脂肪酸为底物生产长链二元酸的方法，其特征是，包含以下步骤：（1）一级种子液的制备：取冻存的菌株的甘油冻存管，接种在装有 YPD培养基的摇瓶中，至于摇床培养12h～24h，制得种子液；将所述的种子液接入装有一级种子培养基的摇瓶中，至于摇床培养6h～20h，制得一级种子液，所述菌株为保藏编号为CGMCC No. 16659的假丝酵母菌（Candida sp.）TDTC018；（2）二级种子液的制备：将所述步骤（1）中制得的一级种子液接入装有二级种子培养基的摇瓶中，至于摇床培养8h～24h，制得二级种子液备用；（3）补料发酵：调节发酵液的pH 4～6，设置发酵所需的搅拌转速、温度，将所述步骤（2）中制得的二级种子液接入装有发酵培养基的发酵罐中，补入葡萄糖，用氢氧化钠调节发酵液pH值后，流加月桂酸的月桂醇溶液，直至发酵结束，制得长链二元酸；所述月桂酸的月桂醇溶液为月桂酸溶解于月桂醇的溶液；所述月桂醇与所述月桂酸的摩尔比为1：1，所述加热保温温度为50～55℃；所述发酵周期中流加乙醇或正十二烷烃作为消泡剂; 所述饱和脂肪酸为月桂酸，所述长链二元酸为月桂二酸。

2.根据权利要求1所述的利用饱和脂肪酸为底物生产长链二元酸的方法，其特征在于，步骤（1）中所述一级培养基的组分为5～12g/LKH₂PO₄，4～12g/L蔗糖，1～10g/L酵母膏，1～4g/L尿素，0～40ml/L重蜡油；步骤（2）中所述二级培养基的组分为5～12g/LKH₂PO₄，4～12g/L蔗糖，1～10g/L酵母膏，1～4g/L尿素，0～50ml/L重蜡油；步骤（3）中所述发酵培养基的组分为6～12g/LKH₂PO_4，5～15g/L蔗糖，1～10g/L酵母膏，1～5g/L尿素，5～50g/L玉米浆，0～5g/L NaCl，4～14g/L KNO₃，1～5g/L吐温60，0.1%～5%消泡剂。

3.根据权利要求1所述的利用饱和脂肪酸为底物生产长链二元酸的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，搅拌转速为300～750rpm，温度为29℃～31℃。

4.根据权利要求1所述的利用饱和脂肪酸为底物生产长链二元酸的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，利用氢氧化钠调节pH值，在12h～18h调pH值至6.8～7.2，在70h～95h调pH值至7.3～7.6，在100h～120h调pH值至7.6～8.0。

5.根据权利要求1所述的利用饱和脂肪酸为底物生产长链二元酸的方法，其特征在于，所述步骤（3）中，月桂酸的月桂醇溶液为月桂酸溶解于纯度98%以上的月桂醇，加热保温使其呈透明溶液。

6.根据权利要求1所述的利用饱和脂肪酸为底物生产长链二元酸的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述补料发酵过程是在5L玻璃发酵罐中完成，所述月桂酸的月桂醇溶液的补料速度为2～7ml/h。

7.根据权利要求1所述的利用饱和脂肪酸为底物生产长链二元酸的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述补料发酵的发酵周期为116h～186h。