[发明专利]一种乳腺癌自身免疫抗体检测试剂盒及其制备方法与应用

说明书

本发明的试剂盒采用基因重组Renilla‑多抗原融合蛋白来检测血清中的乳腺癌相关自身免疫抗体，具有较高灵敏度与特异性，为乳腺癌的诊断提供依据，为进一步病理学诊断提供筛选条件。检测快速方便，检测结果准确，对患者无伤害且无放射免疫的污染，可以满足临床诊断的需要，尤其是基层医疗机构和社区全科医生的需求，市场前景广阔。

技术领域

本发明涉及试剂盒，尤其涉及一种检测快速方便，检测结果准确，对患者无伤害且无放射免疫的污染，可以满足临床诊断的需要的乳腺癌自身免疫抗体检测试剂盒及其制备方法与应用。

背景技术

目前市场上检测乳腺癌相关的检测试剂盒一般检测的肿瘤标志物一般为抗原、易感基因与抑癌基因以及表皮生长因子受体-2(Her-2)等，具体如下：

癌胚抗原(CEA)、铁蛋白、单克隆抗体CA(CA153、CA549)、表皮生长因子受体-2(Her-2)、雌激素，孕激素，雌激素受体和孕激素受体(ER、PR)、上皮生长因子受体(EGFR)、抑癌基因P53、易感基因BRCA1、BRCA2、自身抗体MMP-7以及IGBR、CD117、BCL-2、PCNA等。

关于自身免疫抗体的检测试剂盒较少。已有的较少的试剂盒一般采用酶联免疫法(ELISA)，或者胶体金的方法。

ELISA：将抗原重组蛋白包被在酶标板上，使用惰性蛋白封闭后使用。在酶标孔中加入标准品或样品进行孵育，再加入联有辣根过氧化物酶的抗人IgG的抗体后继续反应，加入底物反应，终止反应后测得OD450nm的吸光度值，即可反应样本中目标抗体的含量。

首先目前市场上存在的自身免疫抗体检测试剂盒较少，其他类别肿瘤标志物对于疾病诊断结果的判断依据不如自身免疫抗体的指标精确。

其次酶联免疫法(ELISA)的方法检测耗时长，结果测定不准确，特异性与灵敏度不高，影响结果准确性的干扰因素较多。

发明内容

本发明的目的在于为了解决现有乳腺癌相关的检测试剂盒较少，检测耗时长，结果测定不准确，特异性与灵敏度不高，影响结果准确性的干扰因素较多的缺陷而提供一种检测快速方便，检测结果准确，对患者无伤害且无放射免疫的污染，可以满足临床诊断的需要的乳腺癌自身免疫抗体检测试剂盒。

本发明另一个目的是为了提供该试剂盒的制备方法与应用。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种乳腺癌自身免疫抗体检测试剂盒，所述试剂盒含有融合蛋白、缓存液1、酶底物、缓存液2、阴性对照品、阳性对照品与96孔板。

在本技术方案中，本发明的试剂盒，使用化学发光免疫的方法，使用荧光素酶与抗原连接的融合蛋白进行目的抗体的筛选，加入底物后通过测定荧光检测值的大小来定量的判定样本中目的抗体的含量，通过综合数据分析后，为临床早期筛选与诊断癌症时期提供有效的依据。该试剂盒采用基因重组Renilla-多抗原融合蛋白来检测血清中的乳腺癌相关自身免疫抗体，具有较高灵敏度与特异性，为乳腺癌的诊断提供依据，为进一步病理学诊断提供筛选条件。检测快速方便，检测结果准确，对患者无伤害且无放射免疫的污染，可以满足临床诊断的需要，尤其是基层医疗机构和社区全科医生的需求，市场前景广阔。

作为优选，所述融合蛋白由以下方法制备：选取荧光素酶基因和多抗原基因的目的序列HER2抗原基因序列、MUC1抗原基因序列，进行PCR扩增，在kpnl位点GGTACC引入限制性内切酶，获得目的片段，做凝胶电泳进行鉴定；

根据HER2基因序列Genebank：NC_000017.11设计引物，

正向引物5′CGGGGTACCCCGATGCCCCGG3′，

反向引物5′TGCTCTAGATCACACTGG3′，以健康人血清为模板，PCR扩增基因；