[发明专利]一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法

说明书

本发明涉及一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法，包括如下步骤：配制12种多酚类标准物质的标准溶液、样品处理、样品UPLC‑MS‑MS分析和计算。本发明方法测定的12种多酚的回收率介于84.7%~102%，相对标准偏差1.9%~5.7%，定量限介于0.5~8.0μg/g之间，该方法灵敏、准确，适用于新鲜烟叶中12种多酚的含量分析。

技术领域

本发明涉及一种测定多酚类化合物的方法，尤其是一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法。

背景技术

多酚类化合物是烟草中含量较丰富的一类物质，在烟草的生长发育、烟叶外观色泽、调制特性、香吃味及烟气生理强度等方面均起着重要作用，是衡量烟草品质的一个重要因素。烟草多酚的含量和氧化程度不仅影响到烟叶的外观质量，也影响烟叶的内在质量。多酚在烟草燃吸时产生微酸性产物，可中和部分烟气碱性，醇和烟气。一些多酚本身具有令人愉快的香气，且在燃吸时裂解产生多种芳香物质，因此多酚类被认为是产生烟草香气的主要成分之一，是烟草中重要的香气前体物。

以往研究认为绿原酸、芸香苷和莨菪亭是烟草中的主要多酚，行业标准YC/T202—2006只测定这3种多酚。随着色谱分析方法的发展，分析的多酚种类由3种到更多。采用液相色谱分析时，一般分析含量相对较高的6种多酚，也有分析8种多酚的报道。

液相色谱-串联质谱的运用，使得更多种类的多酚鉴定和分析变得容易，现有技术分析了烟草中18种多酚，但该方法仅进行了添加回收验证，并未实测样品，事实上其中一些多酚在烟叶不能检出，因此该方法不具有实际意义。还有的现有技术利用液相色谱定量分析烟草中11种多酚，并利用飞行时间质谱定性分析了14种多酚。由于植物多酚种类繁多，有些不易得到标准物质，有些在烟草中不能稳定检测。如何有效、准确的测定烟叶中的多酚类化合物，是急需解决的问题。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提出一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法，该方法建立了超高效液相色谱-串联质谱检测方法，以期为烟草品质评价和代谢研究提供技术支持。本发明的技术方案具体如下：

一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法，包括如下步骤：

步骤（1）、配制12种多酚类标准物质的标准溶液

步骤（2）、样品处理

准确称取一定量冻干烟叶粉末，加入甲醇，超声后离心，取上清液经滤膜过滤后上机分析；

步骤（3）、样品UPLC-MS-MS分析

分析条件如下：

色谱柱：Acquity HSS T3柱，2.1×100 mm，1.7µm；流动相：A为含0.1%甲酸的水，B为甲醇；洗脱程序：0 min 10% B，10 min 25% B，13 min 100% B，13.5 min 100% B，14 min10% B，16 min 10% B；流速：0.4 mL/min；柱温：30℃；进样量：5μL；

质谱电离方式：电喷雾电离模式；监测方式：多反应监测；喷雾电压：3000 V；雾化气流速：750 L/h；辅助气流速：50 L/h；离子源温度：120 ℃；

步骤（4）、计算

根据步骤（1）配制的12种多酚化合物不同浓度的混合标准溶液，采用加权回归法，得出各种多酚的工作曲线及其相关系数；对提取后的样品待测液进行测定，测得多酚化合物的定量离子对峰面积，代入标准曲线求得样品中的多酚化合物的含量。

进一步地，步骤（1）中，12种多酚类标准物质为咖啡酸、阿魏酸、莨菪亭、香豆素、新绿原酸、莨菪苷、山奈酚、山奈酚苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、绿原酸、隐绿原酸和芸香苷，分别称取12种多酚类标准物质0.1 g至100 mL容量瓶中，精确至0.0001g，用甲醇定容，配制成浓度为1000μg/mL的单一标准储备液。