[发明专利]一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法

权利要求书

1.一种测定新鲜烟叶中12种多酚类化合物的方法，其特征在于：包括如下步骤：

步骤（1）、配制12种多酚类标准物质的标准溶液

步骤（2）、样品处理

准确称取一定量冻干烟叶粉末，加入50%甲醇，超声后离心，取上清液经滤膜过滤后上机分析；

步骤（3）、样品UPLC-MS-MS分析

分析条件如下：

色谱柱：Acquity HSS T3柱，2.1×100 mm，1.7µm；流动相：A为含0.1%甲酸的水，B为甲醇；洗脱程序：0 min 10% B，10 min 25% B，13 min 100% B，13.5 min 100% B，14 min 10%B，16 min 10% B；流速：0.4 mL/min；柱温：30℃；进样量：5μL；

质谱电离方式：电喷雾电离模式；监测方式：多反应监测；喷雾电压：3000 V；雾化气流速：750 L/h；辅助气流速：50 L/h；离子源温度：120 ℃；12种多酚化合物的检测参数如表1所示：

表1测定的多酚种类及检测参数

步骤（4）、计算

根据步骤（1）配制的12种多酚化合物不同浓度的混合标准溶液，采用加权回归法，得出各种多酚的工作曲线及其相关系数；对提取后的样品待测液进行测定，测得多酚化合物的定量离子对峰面积，代入标准曲线求得样品中的多酚化合物的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，12种多酚类标准物质为咖啡酸、阿魏酸、莨菪亭、香豆素、新绿原酸、莨菪苷、山奈酚、山奈酚苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、绿原酸、隐绿原酸和芸香苷，分别称取12种多酚类标准物质0.1 g至100 mL容量瓶中，精确至0.0001g，用甲醇定容，配制成浓度为1000μg/mL的单一标准储备液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，移取咖啡酸、阿魏酸、莨菪亭、香豆素4种单一标准储备液各1 mL至20 mL容量瓶中，用50%体积浓度的甲醇定容，得到浓度为50 μg/mL 的4种低含量多酚的混合储备液。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，移取新绿原酸、莨菪苷、山奈酚、山奈酚苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷5种单一标准储备液各5 mL至50 mL容量瓶中，用50%体积浓度的甲醇定容，得到浓度为100 μg/mL 的5种中等含量多酚的混合储备液。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，移取绿原酸、隐绿原酸、芸香苷3种单一标准储备液各10mL至50mL容量瓶中，用50%体积浓度的甲醇定容，得到浓度为200 μg/mL的3种高含量多酚混合储备液。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，准确称取25mg冻干烟叶粉末，加入5mL 50%体积浓度的甲醇，超声20min，12000r/min离心5min，取上清液经0.22μm滤膜过滤后上机分析。