[发明专利]分离纯化高含量南极磷虾磷脂的方法

说明书

本发明公开了一种分离纯化高含量南极磷虾磷脂的方法，包括以下步骤：将南极磷虾制成南极磷虾粉，制备酶解体系用溶液，在酶解体系用溶液中加入α‑淀粉酶、胰蛋白酶均匀混合后再加入南极磷虾粉进行酶解反应，得酶解液；向酶解液中加入1,2‑二氯甲烷，先振荡，然后离心，取下清液旋转蒸发至近干，得南极磷虾油；向南极磷虾油加入4±0.5℃预冷的丙酮，析出物为南极磷虾磷脂。采用本发明方法能分离纯化获得磷脂型EPA和DHA总含量高(≥30％)的南极磷虾磷脂。

技术领域

本发明涉及南极磷虾磷脂的制备方法，特别是一种分离纯化高含量南极磷虾磷脂的方法。

背景技术

南极磷虾(Euphausia superba)是南大洋南极海域所发现的磷虾一种。它是目前地球上海洋生物最大聚集的动物之一，也是至今发现分解蛋白质最强的酶生产者。南极磷虾中油的含量占其干重的15％左右，南极磷虾幼体脂肪酸总含量最高，其不饱和脂肪酸是目前自然界中唯一以磷脂型态结合ω-3(EPA、DHA)和多样性超强抗氧化物(磷脂型虾青素astaxanthin)的分子结构，而饱和脂肪酸含量较低，在不饱和脂肪酸中，含有人体必需脂肪酸的亚油酸的比例较大，是一种食用安全、营养价值较高的虾类。研究表明，南极磷虾磷脂在预防心血管疾病、促进大脑发育、延缓衰老、缓解痛风和类风湿关节炎吲等方面具有显著功效。

现阶段南极磷虾磷脂的提取技术主要有超临界萃取法、超声波和微波酶辅助提取法、有机溶剂萃取法、酶水解结合溶剂法等。如边晶晶等用正己烷和异丙醇溶剂提取了南美白对虾虾头中的油脂；崔益玮等用氯仿和甲醇提取了南极磷虾粗脂，并用丙酮纯化。虽然溶剂提取法分离的效率较高，便于连续操作，但磷虾磷脂的提取率较低，操作步骤繁琐，而且残留的有机溶剂的含量易超标，并且有些有机溶剂具有较高毒性，这些原因都使此方法的使用受到限制。陈文娟采用蛋白酶水解结合溶剂法提取大黄鱼的鱼卵磷脂，结果表明酶水解法的提取率比溶剂法和超声波法高。超临界萃取法和超声波酶辅助提取法等生产成本较高，使用的设备较为昂贵。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种分离纯化高含量南极磷虾磷脂的方法；采用本发明能分离纯化或得的磷脂型EPA和DHA总含量高(≥30％)的南极磷虾磷脂。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种分离纯化高含量南极磷虾磷脂的方法，包括以下步骤：

A、南极磷虾样品处理：

将南极磷虾制成虾糜后干燥，再粉碎，得南极磷虾粉；

B、酶解体系用溶液制备：

先将磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液和咪唑类离子液体均匀混合，然后加入甲醇，再振荡均匀混合，得酶解体系用溶液；

咪唑类离子液体：甲醇＝1:1～2.5体积比(优选1:1～2.5，最佳1：2)；

咪唑类离子液体：磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液＝0.18～0.22:1(优选0.2：1)；

C、催化反应：

在酶解体系用溶液中加入α-淀粉酶(300±30U/mg)、胰蛋白酶(2500±250U/mg)均匀混合后再加入南极磷虾粉，形成酶解体系；所述α-淀粉酶：南极磷虾粉＝0.8～1.0％的质量比(优选0.9％)，胰蛋白酶：南极磷虾粉＝1.4～1.6％的质量比(优选1.5％)，南极磷虾粉与酶解体系用溶液中的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液的料液比为1g/3～7mL(优选1g/5mL)；

将所述酶解体系置于摇床中以120～200rpm的振幅、45±0.5℃的温度恒温震荡酶解反应110～130min(优选120min)，酶解反应过程中控制酶解体系的pH值为8.0；

酶解反应结束后，冷却至室温，得酶解液；

D、萃取分离磷虾油：