[发明专利]感染细菌性败血症小鼠疾病模型的构建及病情判断方法

权利要求书

1.一种感染细菌性败血症小鼠疾病模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：临床收集患有大肠杆菌疾病畜禽的病料，划线接种于麦康凯筛选培养基，37℃过夜培养；

S2：挑取单个的菌落，继续分离培养；

S3：对 S2 培养的菌落革兰氏染色与镜检，初步确定为大肠杆菌；

S4：肠杆菌科的细菌生化鉴定管进行鉴定，确定分离细菌为大肠杆菌；

S5：用 fosA3、CTX-M、TEM和SHV 耐药基因的引物进行扩增，确定分离的耐药大肠杆菌的耐药基因型，再用小鼠回归实验确定其致病性；

S6：原菌液划麦康凯琼脂平板，挑选单个菌落，接种到液体培养基中过夜培养；

S7：测定每毫升的细菌数，并将其菌液稀释；

S8：选取 18-22g 小鼠 10 只，分为空白对照组和疾病模型构建组；

S9：疾病模型构建组按 0.1ml/10g 进行腹腔注射，注射菌液浓度为 2.0x10⁷CFU/mL，在各个阶段观察临床指标，观察小鼠疾病发展程度；

所述感染细菌性败血症小鼠疾病模型的病情判断方法，包括以下步骤：

（1）观察其致病情况，根据病情发展将症状分为 6 期进行打分；

（2）打分标准：①正常组，反应比较活泼，行为状态都比较正常为 0分；

②反应迟钝，未出现其他体征为 1 分；③无精打采，眼球浑浊，体毛粗乱为 2 分；

④趴着不动，眼睛无法睁开，眼干，无分泌物为 3 分；⑤眼肿，且有白色透明分

泌物为 4 分；⑥眼肿，且有白色透明分泌物为 5 分；⑦剧烈抽搐，半小时内死亡

为 6 分；

所述临床指标如下：

在每个阶段分别采血，检测中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、血小板数、白细胞数、降钙素原、肿瘤坏死因子-α、白介素-1α（IL-1α）和白介素-6（IL-6），建立每个阶段症状与血液生化指标的关系，即该模型根据症状再结合血液指标，判断疾病发展程度。

2.根据权利要求 1所述的感染细菌性败血症小鼠疾病模型的构建方法，其特征在于：步骤 S2 中的培养基为 LB 培养基。

3.根据权利要求 1 所述的感染细菌性败血症小鼠疾病模型的构建方法，其特征在于：步骤 S6 中的培养基为 LB 培养基。

4.根据权利要求 1 所述的感染细菌性败血症小鼠疾病模型的构建方法，其特征在于：步骤 S7 中的细菌的浓度为 2.0x10⁷CFU/mL。

5.根据权利要求 1 所述的感染细菌性败血症小鼠疾病模型的构建方法，其特征在于：步骤 S8 中的小鼠为昆明小鼠。

6.根据权利要求 1所述的感染细菌性败血症小鼠疾病模型的构建方法，其特征在于：步骤 S9 的注射的时间为 20 分钟内完成，注射 1 次。