[发明专利]一种三叶青多糖及其在制备免疫调节剂中的应用

说明书

本发明公开了一种三叶青多糖及其在制备免疫调节剂中的应用，将三叶青粉末加入双蒸水中，回流浸提，获得三叶青藤叶部位粗多糖；将三叶青藤叶部位粗多糖溶于双蒸水，Sevag法除蛋白，接着脱盐，然后过阴离子交换柱，收集0.3‑0.6mol/L NaCl洗脱峰，最后除去NaCl得三叶青藤叶部位多糖。本发明所述三叶青藤叶部位多糖能激活TLR4通路，显著提高OVA免疫小鼠血清抗OVA特异性抗体IgG水平，能显著促进OVA刺激下的淋巴细胞增殖，同时能显著增加LPS诱导的B淋巴细胞增殖。

技术领域

本发明涉及一种三叶青多糖及其作为一种天然TLR4激动剂发挥免疫调节作用。

背景技术

Toll样受体4(Toll-like receptor 4，TLR4)是免疫调节的一个重要受体，也是细菌内毒素(LPS)产生急性炎症作用的一个关键受体。TLR4是LPS激活髓样细胞分化蛋白(MyD88)依赖性途径和β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)依赖性途径在细胞内信号传导级联的唯一Toll样受体。在识别病原体后，TLR4受体会与其配体发生相互作用引起下游信号产生级联反应，并诱导促炎细胞因子和趋化因子表达，上调MHC分子和共刺激分子，从而架起宿主抵御任何病原体攻击时固有免疫识别与适应性免疫应答，即特异性T、B淋巴细胞反应之间的桥梁。因此，TLR4受体激动剂广泛用作疫苗的佐剂，以诱导强效而持久的免疫应答。

多糖普遍存在于动植物和微生物中，是维持生命活动正常运转的基本物质之一，具有多种生物活性和功能，可作为广谱免疫促进剂以增强机体的免疫调节功能。大多数高等植物多糖相对无毒，也不会引起不良反应，这是与免疫调节细菌多糖和人造化合物的主要区别。三叶青学名为三叶崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)，是我国特有的葡萄科崖爬藤属珍稀药用植物，别名蛇附子、三叶扁藤、金丝吊葫芦、三叶对等。三叶青以块根或全草入药，在民间已有较长的药用历史；具有抗肿瘤、保肝护肝和抗病毒等药理作用。

基于三叶青多糖在免疫方面的研究甚少，发明人通过深入的研究发现三叶青多糖对THP-1源性人巨噬细胞的TLR4信号通路具有激活作用；对OVA免疫小鼠有免疫佐剂作用。

发明内容

本发明目的是提供一种三叶青多糖，该多糖可发挥免疫调节作用，特别是作为一种天然TLR4激动剂，扩大了三叶青的药用用途，为寻求安全有效的免疫佐剂提供了研究方向。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种三叶青藤叶部位多糖，所述三叶青藤叶部位多糖按如下方法制备：(1)取三叶青藤叶部位干燥至恒重后粉碎，获得三叶青粉末；将三叶青粉末与双蒸水混合，加热回流提取(优选3-4次)，过滤，取滤液加入体积浓度95％乙醇水溶液，充分混匀，室温静置12h，离心(优选3800r/min离心10min)，取沉淀用无水乙醇洗涤，抽滤，挥去乙醇溶液，沉淀冷冻干燥，获得三叶青藤叶部位粗多糖；(2)将三叶青藤叶部位粗多糖溶于双蒸水，Sevag法除蛋白，接着脱盐，然后过阴离子交换柱，收集0.3-0.6mol/L NaCl洗脱峰，最后除去NaCl得三叶青藤叶部位多糖。

进一步，步骤(1)所述取三叶青藤叶部位45-55℃烘箱干燥至恒重后粉碎。

进一步，步骤(1)所述双蒸水体积用量以三叶青粉末重量计为20-30ml/g。

进一步，步骤(2)所述双蒸水体积用量以三叶青粉末重量计为20-30ml/g。

本发明提供一种三叶青多糖在制备免疫调节剂中的应用，所述免疫调节剂为TLR4通路激活剂，进一步，所述免疫调节剂为提高抗OVA特异性抗体IgG水平促进剂或脾淋巴细胞体外增殖促进剂，其中脾淋巴细胞为OVA刺激下的淋巴细胞或LPS诱导的B淋巴细胞。