[发明专利]一种黑米稻选育方法

说明书

本发明公开了一种黑米稻选育方法，应用于水稻选育技术领域，所述方法包括：以黑米稻为母本、以常规粳稻为父本，进行杂交获得F1种子；F1植株，以常规粳稻为父本回交一次，获得BC1F1种子；种植BC1F1植株，在至少两代的自交过程中执行：选取分子标记检测含有OSB1基因的黑种皮植株、在成熟期选择叶色为绿色且粗蛋白含量低于10.0％的种子，以所选择的种子进行自交。应用本发明实施例，选育只在种皮中表达花青素，不影响水稻光合作用，提高黑米稻产量；且由于含有的粗蛋白含量低，又能解决口感差的问题。

技术领域

本发明涉及水稻选育技术领域，尤其涉及一种黑米稻选育方法。

背景技术

黑米稻是水稻的一种特殊种质，紫黑米富含蛋白质、赖氨酸、植物脂肪、纤维素和人体必需的矿物质Fe、Zn、Cu、Mn、Mo、Se、Ca、P等，以及丰富的维生素B1、B2、B6、B12、D、E和烟酸，还含有一般米缺乏的维生素C、叶绿素、花青素、胡萝卜素及强心甙等特殊成分。由于它还含有的花色素苷可以降低人体胆固醇的含量，所以还可以作为抗氧化剂和增加体质的一种具有保健功能的食品。其富含的蛋白质、赖氨酸、核黄素等元素是普通大米含量的3-5倍。

当前中国推广的黑米稻大部分是整个植株都含有花青素，黑米稻茎秆和叶色均呈黑色，影响水稻正常的光合作用，造成产量不高，且由于产量的不足会造成市场价格较高，由于花青素是在种皮中表达，黑米在市场上都是以糙米形式出现，口感较差。

发明内容

本发明的目的是提供一种黑米稻选育方法，旨在选育只在种皮中表达花青素，不影响水稻光合作用，提高黑米稻产量；且由于含有的粗蛋白含量低，又能解决口感差的问题。

为实现上述目的，本发明提供一种黑米稻选育方法，所述方法包括：

S1：以黑米稻为母本、以常规粳稻为父本，进行杂交获得F1种子；

S2：种植F1植株，以常规粳稻为父本回交一次，获得BC1F1种子；

S3：种植BC1F1植株，至少在BC1F2、BC1F3代自交过程中，选取分子标记检测含有OSB1基因的黑种皮植株、在成熟期选择叶色为绿色且粗蛋白含量低于10.0％的种子，且至少经过5代自交获得定型水稻。

本发明的一种实现方式中，所述包含分子标记检测含有OSB1基因的黑种皮植株，包括：

(21)水稻单苗栽种后8-12天，取每株水稻新鲜叶片于艾本德管中；

(22)加入提取液磨碎成浆；

(23)置于100℃水中温浴9-11min，然后冰浴1-3min，经过12000rpm离心10min，取上清液于艾本德管中，加入酒精和NH4Ac，摇匀置于-20℃环境中静置至少30min；

(24)在转速为12000rpm的条件下离心15min；用70％酒精冲洗沉淀2次，晾干，将风干的DNA溶于ddH₂O中，提取的水稻叶片基因组DNA；

(25)采用PCR检测所提取的水稻叶片基因组DNA，PCR反应条件为:95℃预变性5min，95℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，进行25-35个循环，获得的PCR产物用BamHI进行酶切，酶切产物加通过8％的聚丙烯酰胺凝胶电泳，用银染法显带，获得351bp、222bp、127bp三条带的黑种皮植株。

本发明的一种实现方式中，所述选取分子标记检测含有OSB1基因的黑种皮植株、在成熟期选择叶色为绿色且粗蛋白含量低于10.0％的种子，且至少经过5代自交获得定型水稻，包括：

选取基因引物步骤为：

(31)选取分子标记检测含有OSB1基因的黑种皮植株；