[发明专利]一种用于检测常染色体显性遗传性耳聋家系致聋基因突变的试剂盒

说明书

本发明涉及医学领域，具体涉及一种用于检测常染色体显性遗传性耳聋家系致聋基因突变的试剂盒，该试剂盒中包括特异性引物、PCR混合液及酶切反应混合液等，其中发明人针对常染色体显性遗传性耳聋基因专门设计了对应的特异性引物，利用该试剂盒可以快速的检测出患者体内MYH14基因c.5417位点的C到A突变，从而更好的在该家系乃至全国范围内进行MYH14基因突变的大规模筛查和预防性检查，且检测成本低，操作简单，准确率高。

技术领域

本发明涉及医学基因检测领域，具体涉及一种用于检测常染色体显性遗传性耳聋家系致聋基因突变的试剂盒。

背景技术

耳聋是最为常见的感觉功能障碍疾病，已成为全球性公共卫生问题，得到国际社会和各国政府的高度重视。据估计全球高达2.78亿人有听力障碍，中国约有2780万患者，占全球患者的10％左右。并且，每年新生儿重度耳聋发病率约为2‰，即每年新增聋儿2000余名。聋病患者失去听觉和言语交流能力，大多不能接受正常教育，导致知识和受教育水平较低，不具备很好的生活和工作能力，已成为社会和家庭的沉重负担，是引起社会动荡和不稳定的重要因素。聋病已成为严重影响患者生活质量、影响家庭和社会和谐发展的重大疾病之一。

神经性耳聋的病因有遗传因素、环境因素、年龄因素、噪声暴露、使用耳毒性药物等。研究发现，遗传学作用在听力障碍形成的机制中发挥着重要作用，约有60％的神经性聋是由遗传因素引起的。到目前为止，针对非综合征型耳聋共有110多个基因已被确定，遗传性耳聋基因的定位和识别方面取得了巨大的进步。然而，还有大量与遗传性耳聋相关的基因未被发现。

2003年，Leal等定位并克隆了MYH14基因，它位于19号染色体，包含41个外显子,长达108kb。外显子1为非翻译区，编码1995个氨基酸长度、分子量228kD的蛋白质。MYH14包括一个N端肌球蛋白头部结构域，2个IQ结构域，及一个C端肌球蛋白尾部。MYO7A、MYO15、MYH9、MYO6、MYO3A及MYO1A这6种肌球蛋白基因，它们的突变分别导致DFNA2、DFNB3、DFNA7、DFNA22、DFNB30及DFNA48型耳聋。因为所编码蛋白与MYH9具有高度同源性，MYH14被认为是19q13.33区域内最有可能的耳聋候选基因。2004年，Golomb等发现其在多种人体组织有表达，在骨骼肌内表达最高；而在小鼠发育期的耳蜗感觉区和肠上皮细胞端区亦有MYH14的表达。2004年，Donaudy等证实MYH14基因在小鼠耳蜗中表达，并对300名欧洲不同国家的耳聋患者及DFNA4家系实施了MYH14的突变筛查。他们在DFNA4连锁的大家系及一例散发病例中发现了一处无义突变和三处错义突变，上述突变在200名正常对照中没有发现，人们首次确认MYH14基因是DFNA4型耳聋的致病基因。

针对现有已知位点，检测突变位点的黄金方法是直接测序法，但该操作繁琐，费用昂贵限制了它的广泛应用。另外，新一代测序法、基因芯片筛查法、荧光定量PCR法等，设计和检测成本较高，不适合检测单个已知突变位点，也不易在临床进行推广。因此急需一种快速、简便、准确、经济的基因突变检测方法，来满足临床上对常染色体显性遗传性耳聋家系的聋病患者MYH14基因突变筛查工作的需要。

发明内容

本发明的发明人正是针对现有技术中对MYH14基因突变筛查的研究部分的缺失，首先从一个常染色体显性遗传的耳聋家系里发现了一个MYH14基因上c.5417C到A的新突变位点，携带该突变的患者来源一个常染色体显性遗传的家系，患者均表现为非综合征性中度至重度的全频神经性聋。基于这一发现，发明人进一步设计了特异性引物及应用该引物的试剂盒，利用该试剂盒可以快速的检测出患者体内或胚胎中MYH14基因c.5417的C到A突变位点，从而更好的在该家系及全国范围内进行耳聋相关基因突变的大规模筛查和预防性检查，且检测成本低，操作简单，准确率高。