[发明专利]基于非线性化学指纹图谱鉴别小米产地的方法

权利要求书

1.基于非线性化学指纹图谱鉴别不同产地小米的方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、建立前处理后的化学成分的非线性化学指纹图谱：

Ⅰ、样品前处理：

S1、将小米进行粉碎处理，并过80目筛，然后浸泡在温度为50-65℃的水中，浸泡时间为120-160min，然后进行打浆处理，所得记为小米浆；

S2、向S1中所得的小米浆中加入质量为其0.3-0.7%的混合蛋白酶并调节pH为6.0-7.0然后置于超声波细胞破碎仪中破碎处理4-8min后，调节水温为48-50℃，保温浸泡5-9h，所得记为混合组分A；

S3、向混合组分A中加入质量为其0.4-0.7%的复合淀粉酶，并调节混合组分的pH值为5.8-6.5，调节水温为50-55℃，超声分散4-8min后保温浸泡25-40min；然后升温至80-85℃，超声分散5-10min后保温浸泡30-50min，再将温度升至95-100℃，保温25-40min；

S4、将S3所得进行真空减压排气，然后再将混合组分B移入离心分离机中离心200-260s后再经过滤处理，弃去滤渣，所得滤液记为混合组分B；

Ⅱ、绘制前处理后的样品的非线性化学指纹图谱；

准确量取10mL混合组分B并移至微波水解石英杯中，然后向其中加入10mL浓度为4.0moL/L硫酸溶液，盖好石英杯，并将石英杯放入密封装置中，拧紧，插入温度传感器，抽真空，充入高纯氮气以保护样品，重复3次；

在800W功率条件下，不同水解温度下水解不同时间，当温度冷却至室温后打开密封装置，取出水解槽，将微波水解瓶逐一取下后，将水解液转移至倒入带有磁力搅拌器的恒温水浴杯中，相继加入12ml，0.080mol/L的硫酸锰溶液与5ml，1mol/L的丙酮溶液作为反应底液，并开启磁力搅拌器，调节转速为500r/min；

在另一个恒温水浴杯中加入10ml浓度为0.4mol/L的溴酸钾溶液，待在37℃的温度下恒温10min后，将溴酸钾溶液倒入反应底液，并用电化学工作站记录电压-时间曲线，以绘制出前处理后的样品的非线性化学指纹图谱；

B、检测样品：

取待检测的前处理后的样品，使用与标准样品相同的前处理条件，得出检测样品的图谱，将两者的指纹图谱用直接观察并且以Origin软件分析作为定性依据；

C、重现性考察：

取待检测的前处理后的样品，测定其图谱，测得的非线性化学指纹图谱的各种特征参数的RSD＜3％，表明所述方法具有很好的重现性；

进一步，非线性化学指纹图谱法包括如下步骤：

A-1、标准样品选择：

同一产地同一品牌的小米，以4-8个批次为标准样品；

A-2、非线性化学指纹图谱法分析条件：

检测仪器：瑞士万通204N型电化学工作站，HH-501型超级恒温水浴锅，85-2A型数显恒温磁力搅拌器，213型金属铂电极，217型甘汞电极；黑龙江肇东龙谷25、河北张家口桃花米、内蒙古赤峰小米、辽宁朝阳大金苗、山东章丘龙山米、陕西米脂小米、山西沁州黄小米七个不同产地的小米、10ml浓度为4.0mol/L硫酸溶液、12ml浓度为0.08mol/L的硫酸锰溶液、5ml浓度为1.0mol/L的丙酮溶液，10ml浓度为0.4mol/L的溴酸钾溶液；

A-3、非线性化学指纹图谱信息参数分析：

用Origin软件绘制电压-时间曲线，即获得不同产地小米的非线性化学指纹图谱以及其特征参数；

其中，图谱参数包括：

诱导时间：从加入试剂到振荡发生的时间；

振荡寿命：振荡开始到振荡结束的时间；

最大振幅：振荡过程中相邻电位正峰和负峰之间的最大差值；

最高电位；振荡曲线的电位最高值；

最低电位；振荡曲线的电位最低值；

平衡电位；体系达到热力学平衡时的电位；

测得的非线性化学指纹图谱的各种特征参数的RSD＜3％；

B、检测样品：

取待检测的前处理后的样品，使用与标准样品相同的条件检测，得出检测样品的非线性化学指纹图谱，将两者的非线性化学指纹图谱直接观察并且以Origin软件分析作为定性依据，如果两者的图谱系统的相似度大于97%，可认为是同一产地同一产品，若相似度小于97%，则认为不是同一地区同一产品；

C、重现性考察：

取6份待测前处理后的样品，测定其图谱并进行考察。