[发明专利]一种用于检测EGFR基因突变的试剂盒

说明书

本发明涉及本一种用于检测EGFR基因的试剂盒，包括用于检测EGFR基因19号外显子突变的检测试剂。使用本发明的试剂盒可在同一个反应条件下同时对20个与耳EGFR基因相关的突变进行高通量检测。检测的特异性强，灵敏度高，最低检测限为1ng/μL，用时短，从标本送检到得出结果可在2小时以内完成。

技术领域

本发明涉及肿瘤基因检测领域，更特别地，涉及一种用于检测EGFR基因突变的试剂盒。

背景技术

国际癌症研究机构(LARC)于2013年12月12日公布了2012年全球癌症流行病学最新数据：肺癌是世界范围内发病率(新发肺癌患者182万，占所有新发肿瘤病例的13％)和死亡率(死亡肺癌患者160万，占所有死亡肿瘤病例的19.4％)最高的恶性肿瘤。在中国，肺癌的发病率和死亡率均位居所有恶性肿瘤的首位。2012年中国新发肺癌患者约65.3万，死亡患者约59.7万。在我国近几年来随着城市空气污染的加重，特别是PM2.5含量持续维持高位，肺癌的发病率和死亡率明显上升。估计到2025年我国肺癌年死亡人数可达100万，将成为肺癌第一大国。根据肺癌生物学特征，非小细胞肺癌NSnon-small cell lung cancerCLC占所有肺癌的80％～85％，肺腺癌的发病率已超过鳞腺癌。

EGFR是一种跨膜酪氨酸激酶受体，该受体激酶域的激活对癌细胞增殖、生长的相关信号传递具有重要意义。EGFR基因两种最主要的突变为19外显子缺失(约占45％)和21外显子L858R突变(约占40％)，二者均可导致酪氨酸激酶结构域活化，且均为EGFR-TKIs的敏感性突变。肺腺癌患者EGFR基因敏感突变阳性率在高加索人却约为10％，在亚裔人群和我国均为50％左右。

在过去十多年间，EGFR-TKIs已逐渐成为EGFR基因突变的晚期NSCLC患者的一线标准治疗。具有里程碑意义的随机、对照、大样本Ⅲ期IPASS临床试验首次显示吉非替尼一线治疗EGFR基因突变晚期NSCLC患者的无进展生存时间、肿瘤缓解率和生活质量均优于标准化疗，并且具有良好的安全性。随后，基于EGFR基因突变阳性患者进行的前瞻性Ⅲ期临床试验(NEJ002、WJOG3405、OPTIMAL、EURTAC及LUX-Lung3/LUX-Lung6)，通过与标准化疗比较，充分验证了EGFR基因突变是一线EGFR-TKIs治疗的重要靶点和关键性预测标志物。另一方面，GTONG0806等临床研究和荟萃分析显示，在EGFR基因未发生突变的肺癌患者，因不能降低疾病进展或死亡风险，不宜使用EGFR靶向治疗。因此，以组织和细胞学标本进行EGFR基因突变检测用于指导NSCLC患者EGFR-TKIs治疗已在全球形成共识，成为标准的临床实践。

现阶段EGFR检测的主要方法包括二代测序、Sanger测序、荧光PCR等。这些方法或耗时长，操作复杂，或对操作者和实验场地有较高要求，或检测费用较高，或难以同时检测多个基因的不同突变位点。因此，有必要建立一种高通量、高效率、低成本的检测方法和产品，以实现快速检测。

微流控技术是以微加工技术实现微体积反应，并可实现高通量反应使得手工操作和检测成本大幅降低，显著提高效率。

现阶段临床对EGFR基因突变检测的主要方法包括直接测序、基因芯片、基因扫描、PCR-电泳、荧光PCR、数字PCR等。这些方法或耗时长，操作复杂，或对操作者和实验场地有较高要求，或检测费用较高，或难以同时检测多个基因的不同突变位点。因此，有必要建立一种高通量、高效率、低成本的基因突变检测方法和产品，以实现临床快速检测。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供了一种用于检测EGFR基因的试剂盒，包括用于检测EGFR基因19号外显子突变的检测试剂。

在一个优选实施方案中，所述检测试剂包括用于扩增覆盖所述基因的突变位点的引物对，以及检测所述突变位点的探针。