[发明专利]一种银杏提取物及其制剂中黄酮和内酯同时测定的方法

权利要求书

1.一种银杏提取物及其制剂中黄酮和内酯同时测定的方法，其特征在于：采用高效液相色谱分离，质谱检测器在选择反应监测MRM模式下检测，对16种黄酮和4种内酯同时测定；该方法包括以下步骤：

1）制备对照品溶液：分别称取槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷、杨梅素-3-O-芸香糖苷、山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷、芦丁、山奈酚-3-O-对香豆酰基葡萄糖芸香糖苷、万寿菊素-3-O-芸香糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-2”-葡萄糖基鼠李糖苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、异鼠李素-3-O-芸香糖苷、丁香黄素-3-O-芸香糖苷、3’,5’-二甲氧基杨梅素-3-O-芸香糖苷、山奈酚-3-O-2”-葡萄糖基鼠李糖苷、槲皮素-3-O-对香豆酰基葡萄糖基鼠李糖苷、山奈酚-3-O-对香豆酰基葡萄糖基鼠李糖苷、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯对照品，分别加稀释溶剂得到20个单标；再分别量取各单标，置同一容器中，得到混合对照品溶液；稀释溶剂为水或甲醇水溶液，稀释溶剂中水的体积含量为50-100%；

采用高效液相色谱-质谱对单标进行测定，以单标定性及优化质谱参数；

采用高效液相色谱-质谱对不同浓度的混标进行测定，以不同浓度的混标做定量曲线；

2）制备待测样品溶液：待测样品为银杏提取物及其制剂中的一种或二种以上，用与上述相同的稀释溶剂稀释定容；

采用高效液相色谱-质谱进行待测样品测定，同时进行20种目标物的含量测定；

高效液相色谱条件：

仪器：超高效液相色谱仪为Waters UPLC Acquity UPLC I-CLASS

色谱柱：Acquity UPLC BEH Shield RP18柱，2.1×100 mm

流动相：A，乙腈；B，水-0.1%甲酸

梯度：12% A经10 min达38% A

流速：0.3 mL/min

柱温：30 ℃

制定质谱MRM条件：

质谱仪为Waters Xevo TQ-XS，20种化合物的质谱参数优化结果如下：

20个目标化合物的保留时间、选择反应监测定量离子对、锥孔电压和碰撞能；

1）槲皮素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷，4.18 min，755.2300.0，100 V，44 eV；

2）杨梅素-3-O-芸香糖苷，4.20 min，625.2316.1，100 V，36eV；

3）山奈酚-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷，4.71 min，739.3284.1，94 V，42eV；

4）异鼠李素-3-O-2”,6”-二鼠李糖基葡萄糖苷， 4.75min，769.3314.2，100 V，40eV；

5）芦丁，5.05 min，609.2300.1，48 V， 40eV；

6）山奈酚-3-O-对香豆酰基葡萄糖芸香糖苷，4.48 min，901.3739.3， 84V，30eV；

7）万寿菊素-3-O-芸香糖苷，4.99 min，639.2330.2， 98V， 38eV；

8）槲皮素-3-O-葡萄糖苷，5.55 min，463.1300.2， 78V，26eV；

9）槲皮素-3-O-2”-葡萄糖基鼠李糖苷，5.74 min，609.2300.1， 48V， 40eV；

10）山奈酚-3-O-芸香糖苷，5.84 min，593.2284.9， 100V，32eV；

11）异鼠李素-3-O-芸香糖苷，5.88 min，623.2315.0，100 V， 30eV；

12）丁香黄素-3-O-芸香糖苷，5.72 min，653.2345.1， 82V，34eV；

13）3’,5’-二甲氧基杨梅素-3-O-芸香糖苷，5.88 min，653.2345.1，100 V， 40eV；

14）山奈酚-3-O-2”-葡萄糖基鼠李糖苷， 6.56min，593.2284.1，98 V，34eV；

15）槲皮素-3-O-对香豆酰基葡萄糖基鼠李糖苷，7.90 min，755.2300.0，100 V，44eV；

16）山奈酚-3-O-对香豆酰基葡萄糖基鼠李糖苷，8.66 min，739.3284.1，100 V，46eV；

17）银杏内酯A，7.03 min，407.2319.2， 62V， 14eV；

18）银杏内酯B，7.09 min，423.2367.2，28 V，14 eV；

19）银杏内酯C，4.42 min，439.1383.2， 30V，14eV；

20）白果内酯，5.07 min，325.1163.1，30 V，20 eV。